流式細(xì)胞技術(shù)與圖像處理-在線瀏覽
2025-07-18 11:57本頁(yè)面
【正文】 電子數(shù)據(jù)系統(tǒng)構(gòu)成： ? 光電檢測(cè)器 將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電子信號(hào)。 ? 模數(shù)轉(zhuǎn)換器 將模擬的電脈沖信號(hào)轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)。 光電檢測(cè)器 (photodetector) ? 光電二極管 (photodiode) 光靈敏度低，測(cè)定強(qiáng)信號(hào)（ FSC）； ? 光電倍增管 (photomultiplier, PMT) 光靈敏度高，測(cè)定弱信號(hào)（ SSC, FL1, FL2, FL3, FL4)。 ? 前向散射光 (forward scatter, FSC)。 流式細(xì)胞分析的信息 —— 光信號(hào)檢測(cè) 流式細(xì)胞的基本信息 : “形態(tài)” 散射光的作用 ? 實(shí)驗(yàn)中，常利用 FSC和 SSC這兩種參數(shù)的組合，區(qū)分不同的細(xì)胞群體，去除碎片、死細(xì)胞和粘連細(xì)胞的干擾。 ? 密度圖：點(diǎn)密度越大的地方細(xì)胞越多，點(diǎn)密度越小的地方細(xì)胞少。 橢圓形 圓形 十字門 線性門 流式分選 電荷式 分選 ?超聲振動(dòng)器 (15100kHz) ?液流充電系統(tǒng) ?高壓偏轉(zhuǎn)板 ?收集裝置 (流式管、培養(yǎng)板 ) lasers 斷裂點(diǎn) (充電 ) 高壓偏轉(zhuǎn)板 第二節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)的科研應(yīng)用 ?分析群體細(xì)胞 ?所需時(shí)間短 ?多參數(shù)分析 ?定性或定量 流式應(yīng)用常見(jiàn)范圍 ? 細(xì)胞大小 ? 細(xì)胞的顆粒度 ? 細(xì)胞表面分子： CD 系列等 ? 細(xì)胞漿內(nèi)分子：胞內(nèi)細(xì)胞因子等 ? 細(xì)胞核內(nèi)分子： P53 ? 細(xì)胞功能檢測(cè)：細(xì)胞周期、凋亡、 PH、Ca++、細(xì)胞活性等 樣品 培養(yǎng)細(xì)胞 新鮮組織 石蠟包埋 單細(xì)胞 懸液 標(biāo)記 熒光抗體 檢測(cè) 表型測(cè)定 細(xì)胞分選 流式細(xì)胞術(shù)操作流程 統(tǒng)計(jì)學(xué) 分析 繼續(xù) 培養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的處理 ? 單細(xì)胞懸液的制備： 胰酶消化 ? 抗體或標(biāo)記分子的染色： 抗原抗體反應(yīng) ? 非特異結(jié)合的去除： 洗滌和封閉 封閉：血清和同型抗體 細(xì)胞染色 ? 染色要求： ? 特異識(shí)別某一群細(xì)胞，有效區(qū)分不同細(xì)胞亞群 ? 非特異反應(yīng)水平低 ? 抗體效價(jià)高，用量適用于常規(guī)標(biāo)本 ? 使用特異的單克隆抗體 ? 最好使用熒光直接標(biāo)記的抗體 ? 采用適當(dāng)?shù)年幮詫?duì)照物 ? 抗體最適滴度 抗體的選擇 ? 首選直接標(biāo)記抗體 ? 熒光分子： PE最強(qiáng)，適用于弱表達(dá)抗原
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