流式細(xì)胞技術(shù)與圖像處理(存儲(chǔ)版)
【正文】 photodetector) ? 光電二極管 (photodiode) 光靈敏度低，測(cè)定強(qiáng)信號(hào)（ FSC）； ? 光電倍增管 (photomultiplier, PMT) 光靈敏度高，測(cè)定弱信號(hào)（ SSC, FL1, FL2, FL3, FL4)。 鞘液 鞘液 細(xì)胞流 激光照射點(diǎn) 流體動(dòng)力學(xué)聚焦示意圖 液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng) 進(jìn)樣速率控制 ? 通過(guò)改變樣本壓力可以調(diào)節(jié)樣本的進(jìn)樣速率，而這并不是提高樣本流的流速，而是改變了細(xì)胞之間的距離。FLOW CYTOMETRY 流式細(xì)胞技術(shù) 流式細(xì)胞術(shù) 流式細(xì)胞術(shù)（ Flow Cytometry， FCM）是以流式細(xì)胞儀為檢測(cè)手段的一項(xiàng)能快速、精確的對(duì)單個(gè)細(xì)胞 (或生物學(xué)顆粒 )的理化特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的技術(shù)。 ? 高速時(shí)樣本流變寬，單位時(shí)間內(nèi)流經(jīng)激光照射區(qū)的細(xì)胞數(shù)就增加，這樣會(huì)導(dǎo)致變異系數(shù)增加。 PMT 前向散射光 光電二極管 光信號(hào)的類型： ? 散射光信號(hào) ： 與標(biāo)記熒光素?zé)o關(guān)， 是細(xì)胞的固有參數(shù)。 （特別在檢測(cè)陰性時(shí)） 流式檢測(cè)應(yīng)用實(shí)例 ?細(xì)胞表面、細(xì)胞內(nèi)分子檢測(cè) ?細(xì)胞周期分析 ?細(xì)胞凋亡分析 淋巴細(xì)胞表面抗原分析 ? 樣本來(lái)源 ? 新鮮抗凝全血 ? PBMC ? 單克隆熒光抗體染色 ? 溶血 ? 洗細(xì)胞 ? 固定 ? 上機(jī)檢測(cè) 淋巴細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)抗原分析 ? 樣本來(lái)源 ? 新鮮抗凝全血 ? PBMC ? 細(xì)胞表面抗體染色 ? 溶血、固定 ? 細(xì)胞打孔 ? 細(xì)胞內(nèi)抗體染色 ? 上機(jī)檢測(cè) 細(xì)胞周期分析： G1 M G2 S Quiescent cells G0 ? 處于不同細(xì)胞周期的細(xì)胞 DNA含量不同，G0/G1期細(xì)胞含有 二倍體 量的 DNA， G2/M期細(xì)胞含有 四倍體 量的 DNA，而 S期細(xì)胞 DNA含量處于 二倍體和四倍體量之間 。 Annexin VFITC/ PI雙染色法 雙陰：活細(xì)胞 Annexin VFITC單陽(yáng)：早期凋亡細(xì)胞 雙陽(yáng)：晚期凋亡細(xì)胞 PI 單陽(yáng)：壞死細(xì)胞 PI常用于鑒別死細(xì)胞。 PI 被用來(lái)區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞。 設(shè)門與數(shù)據(jù)分析 ? 門 (Gate，簡(jiǎn)寫 G)是流式細(xì)胞術(shù)中的一個(gè)重要術(shù)語(yǔ)， FCM數(shù)據(jù)分析過(guò)程實(shí)際上就是選門和設(shè)門的過(guò)程。 ?
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