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正文內(nèi)容

免疫細(xì)胞化學(xué)與圖像分析(存儲(chǔ)版)

  

【正文】 均勻的視場(chǎng)內(nèi)存在著不均勻的電子反應(yīng),這使得灰度相同的圖像成分由于在視場(chǎng)中所處位置不同而顯示出不同的灰度,這種影響必須校正才能使圖像得到準(zhǔn)確測(cè)量?! ?.資料分析 將資料進(jìn)行分類,并加以說(shuō)明,以便做出結(jié)論。網(wǎng)格可分為兩大類:一類是置于目鏡內(nèi)的網(wǎng)格,可測(cè)量切片標(biāo)本上的各種數(shù)據(jù);另一類是大的網(wǎng)格,可放在照片上,光鏡電鏡照片均可用,對(duì)照片上的各種結(jié)構(gòu)可進(jìn)行測(cè)量。染色強(qiáng)度分為0級(jí)、1級(jí)(輕度)2級(jí)、(中度)、3級(jí)(重度)。方格直線交叉稱為測(cè)點(diǎn),總數(shù)為100個(gè),方格中所有直線稱為測(cè)線,小方格邊長(zhǎng)為d如圖中所示,測(cè)線總長(zhǎng)度為200d,整個(gè)大方格為測(cè)面,測(cè)面總面積為100d2,測(cè)格周圍的虛線不是測(cè)線。圖95為一測(cè)量的例子:圖9-4 關(guān)聯(lián)方測(cè)格圖95 示測(cè)點(diǎn)計(jì)數(shù)  此關(guān)聯(lián)方測(cè)格共有測(cè)點(diǎn)100個(gè)(如果只計(jì)數(shù)粗測(cè)點(diǎn)則有25個(gè)),圖像為一個(gè)腎小體的輪廓,包括血管球和腎小囊腔,測(cè)點(diǎn)計(jì)數(shù)的結(jié)果,在腎小囊腔內(nèi)的測(cè)點(diǎn)數(shù)為12,在血管球內(nèi)的測(cè)點(diǎn)為49個(gè),整個(gè)腎小體內(nèi)的測(cè)點(diǎn)為12+49=61個(gè),用臺(tái)微尺測(cè)出d的長(zhǎng)度,則可得到此圖像中腎小囊腔的面積,血管球的面積,腎小體的面積?! D97為一咱擺線測(cè)格,可用來(lái)方便地測(cè)表面積密度。擺線與特征物(如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜、線粒體的膜等)的交叉點(diǎn)容易數(shù),用上述IL和SV公式即可得出所需參數(shù)。骨骼肌纖維的長(zhǎng)軸、長(zhǎng)骨的長(zhǎng)軸均可作為垂直軸,與其平行的切片也作為垂直切片。Bordier 等1982年用圖像分析法對(duì)大鼠的神經(jīng)垂體進(jìn)行研究,闡明了軸突占神經(jīng)垂體體積的一半,分泌顆粒占軸突體積的20%,加壓素的含量與分泌顆粒的體積密度無(wú)關(guān),而與分泌顆粒內(nèi)激素濃度有關(guān)。②人脊神經(jīng)節(jié) 內(nèi)SP、SK、CGRP免疫反應(yīng)細(xì)胞的比率(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)方秀斌等),用人工計(jì)數(shù)方法。  七、圖像分析與體視學(xué)  圖像分析還可用于三維重建,用連續(xù)切片可重建立體的原形,在神經(jīng)組織的研究中很適用?! ∠啵╬hase):所有在本質(zhì)上相同的組分的集合稱為相?! ”砻娣e密度(surface density):?jiǎn)挝话菘臻g內(nèi)所含有某相的表面積。此處的Vv即單位體積細(xì)胞質(zhì)內(nèi)某種細(xì)胞器的體積,據(jù)體視學(xué)原理,Vv等于切片上被測(cè)的某種細(xì)胞器所占的面積的均數(shù)a與細(xì)胞質(zhì)的面積的均數(shù)A之比,如用圖像分析儀即可得出此二者的面積,而用測(cè)試格a等于落在此細(xì)胞器上的測(cè)試格的交點(diǎn)總數(shù)∑Pi,A等于落在細(xì)胞質(zhì)上的測(cè)試格交點(diǎn)總數(shù)∑Pc。打破了以往只能在大中型計(jì)算機(jī)加專用圖像處理系統(tǒng)的構(gòu)成價(jià)格昂貴的圖像處理系統(tǒng)的局面。圖像存儲(chǔ)體:MIAS—~(兆字節(jié)?。?,MIAS—~,MIAS—1000 2MB~10MB 。主要功能包括初始化及環(huán)境設(shè)置、圖像輸入和輸出、圖像編輯、圖像增強(qiáng)、圖像分割、圖像測(cè)量、實(shí)用程序等?! ∮?guó)Micro Measurements 公司生產(chǎn)電視掃描圖像分析儀,成本較低,用途較多。該公司產(chǎn)品的新型號(hào)是Leitz PLUS,增加了自動(dòng)調(diào)焦、自動(dòng)圖像旋轉(zhuǎn)等功能。要如履薄冰,嚴(yán)于自律,自覺接受黨和人民群眾的監(jiān)督。黨中央向全黨敲響了警鐘,表明了我們黨同腐敗現(xiàn)象作斗爭(zhēng)的堅(jiān)定決心。要進(jìn)一步拓寬民主監(jiān)督渠道,充分發(fā)揮各種監(jiān)督的作用?! ?duì)國(guó)內(nèi)外資料收集比較局限,總之購(gòu)置儀器時(shí)要充分了解性能、對(duì)價(jià)格作比較、才能獲得滿意的結(jié)果。Omnicon 7500是為了對(duì)圖像作實(shí)時(shí)分析而設(shè)計(jì)的產(chǎn)品。具有陰影校正系統(tǒng)。該系統(tǒng)還具備有自動(dòng)移位的載物臺(tái)和自動(dòng)聚集控制系統(tǒng)可供用戶選擇。其主要性能指標(biāo):圖像分辨率512512,640480,12801024。因此,要測(cè)量或估計(jì)參照空間的體積、乘以密度值,獲得絕對(duì)值,才能獲正確的結(jié)論。上述性質(zhì)反映在體視學(xué)符號(hào)中,而這些符號(hào)目前已普遍被使用,在有些文獻(xiàn)中已不再作解釋了?! ∶芏龋╠ensity):?jiǎn)挝惑w積、單位面積或單位長(zhǎng)度內(nèi)的量。一個(gè)結(jié)構(gòu)至少有二個(gè)組分構(gòu)成,體視學(xué)的目的即弄清楚各組分之間相互關(guān)聯(lián)程度、相對(duì)大小等。⑧人胎十二指腸EC細(xì)胞的體視學(xué)研究(江西醫(yī)學(xué)院朱清仙等)用目鏡標(biāo)線片測(cè)格進(jìn)行定量研究。目前已知道,老年性癡呆患者腦中,與記憶、理性行為及感情行為有關(guān)的區(qū)域內(nèi),神經(jīng)元的進(jìn)行性退變,神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)生改變,影響了從一個(gè)神經(jīng)元到另一個(gè)神經(jīng)元的信息傳遞。在第六屆國(guó)際學(xué)術(shù)會(huì)議上發(fā)表的90多篇論文中只有1篇,因此在實(shí)例介紹中,包括一部分不是免疫細(xì)胞化學(xué)方法,而是用其他組織學(xué)方法與圖像分析結(jié)合起來(lái)研究,但這種方法對(duì)研究免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本也可借鑒,從中可得到一些啟發(fā)的,也在此選擇性地作一些介紹。如圖98所示,HP為水平面(horizontal plane),VP為垂直面(vertical planes),二個(gè)垂直面互相不是平行關(guān)系,成一定角度。具體來(lái)說(shuō),用圖97擺線測(cè)格,置于一個(gè)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)照片上,如果整個(gè)測(cè)格均位于照片內(nèi),則參照面內(nèi)測(cè)線總長(zhǎng)度為45d,如果90個(gè)測(cè)點(diǎn)只有60個(gè)落至細(xì)胞內(nèi)(即測(cè)格中有30個(gè)測(cè)點(diǎn)落在此照片外)則參照面內(nèi)的測(cè)線總長(zhǎng)度為d/2表面積密度是指單位體積參照空間內(nèi)特征物的表面積,通過(guò)數(shù)學(xué)運(yùn)算可簡(jiǎn)便地用以下方法測(cè)定:測(cè)量單位面積參照面內(nèi)特征物斷面周界線的長(zhǎng)度。d的長(zhǎng)度可用臺(tái)微尺來(lái)確定。這些都是在實(shí)踐中的一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn),供讀者參考。②在1010放大倍數(shù)下,每一切片用目鏡網(wǎng)格任選25個(gè)方形視場(chǎng)進(jìn)行觀察,并對(duì)每一視場(chǎng)進(jìn)行分級(jí)?! 。?)合作使用:分析儀價(jià)格昂貴,根據(jù)國(guó)內(nèi)目前實(shí)際情況,有些工廠購(gòu)置了圖像儀而僅僅用作工業(yè)金相分析,閑置的時(shí)間很多,我們從事醫(yī)學(xué)研究的人可以去充分利用它的性能,聯(lián)合進(jìn)行科研工作,發(fā)四川省目前最高級(jí)的圖像分析儀就是在工廠中而不是在高等學(xué)校中。圖93??;;;  6.測(cè)量經(jīng)以上各步驟后,可以用圖像分析儀的計(jì)算機(jī)對(duì)圖像進(jìn)行測(cè)量來(lái)取得所需的參數(shù),如灰度、面積、長(zhǎng)度、個(gè)數(shù)等。圖中可以看出每個(gè)部位都將通過(guò)測(cè)量框,不會(huì)遺漏。如果所需相比背景亮,如免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的標(biāo)本,那么亮于上限的東西都被選。計(jì)算機(jī)屏幕上顯示出多項(xiàng)指令,可由光電鼠標(biāo)來(lái)指明你所需要的程序,光電鼠標(biāo)可控制計(jì)算機(jī)屏幕上的一個(gè)光標(biāo),移動(dòng)光電鼠標(biāo)也隨著移動(dòng),將光標(biāo)移到計(jì)算機(jī)屏幕上顯示的某項(xiàng)功能的區(qū)域內(nèi),就表示選擇了該項(xiàng)功能,可以開始工作,極簡(jiǎn)便。又如去甲腎上腺素神經(jīng)纖維呈串珠樣,如果測(cè)出一定范圍內(nèi)神經(jīng)纖維總長(zhǎng)度及局部膨大數(shù)目,即可計(jì)算出串珠平均間隔距離,比較精確。因?yàn)槿菀椎玫奖粶y(cè)物的面積,也就很容易求出平均密度?! ∪绻貌噬珗D像分析儀,除了上述的灰度測(cè)量以外,還可以將不同的灰度編成不同的顏色,使圖像更鮮明美麗,而且便于測(cè)量。更為可喜的是過(guò)去此類研討會(huì)都是請(qǐng)外商到會(huì)介紹他們的產(chǎn)品,為他們提供中國(guó)市場(chǎng),而此次會(huì)議上本國(guó)的三家研制生產(chǎn)圖像分析儀的單位在大會(huì)上介紹各自的產(chǎn)品,以較好的性能價(jià)格比與國(guó)外產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng),擴(kuò)大國(guó)內(nèi)市場(chǎng),我國(guó)在此領(lǐng)域的研究進(jìn)展也是很快的。當(dāng)圖像顯示時(shí),每個(gè)像素含有兩方面的信息,即此像素的灰度及其在標(biāo)本中的位置,兩種信息決定了圖像的形狀和顏色深淺。它已經(jīng)成為一種公認(rèn)的科學(xué)研究工具,并且逐漸展現(xiàn)出巨大的潛能。如有文獻(xiàn)中提到,P物質(zhì)在腦組織中存在于30處以上,這只是解決了定性定位問(wèn)題,這些部位含P物質(zhì)的量是否相同?可否用快速簡(jiǎn)便的方法對(duì)細(xì)胞內(nèi)免疫反應(yīng)產(chǎn)物的量進(jìn)行分析?從而可進(jìn)行比較。政治紀(jì)律遵守不好,其他方面的紀(jì)律也遵守不好。要立志做大事,把心思用在工作上,用在干事業(yè)上,用在為職工群眾謀利益上。免疫細(xì)胞化學(xué)與圖像分析  在細(xì)胞生物學(xué)中,一個(gè)常見的問(wèn)題是如何獲取與細(xì)胞功能相關(guān)的各種定量測(cè)量信息。因此我們力求有一個(gè)客觀的比較精密的標(biāo)準(zhǔn)?,F(xiàn)代圖像測(cè)量是光學(xué)、電子學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)等相互滲透的跨學(xué)科的結(jié)果,涉及廣
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