【正文】 色（real color），如果將不同的灰度轉(zhuǎn)換成不同的顏色則稱為假色（pseudo color），應(yīng)用假色的目的是增強對比度，來改善對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的視覺識別，同時可增強輪廓用來強調(diào)結(jié)構(gòu)的細(xì)節(jié)　。例如，免疫細(xì)胞化學(xué)中常用的非標(biāo)記抗體過氧化物酶—抗過氧化物酶法，最終反應(yīng)產(chǎn)物呈棕色，假設(shè)在腦內(nèi)某核團(tuán)的許多細(xì)胞中，呈現(xiàn)出不同深度的棕色，深淺差別較大者顯示在屏幕上人眼還能區(qū)別，若差別小的則不易區(qū)別了，操作者可將灰度11～15用紅色顯示，灰度16～20用藍(lán)色顯示、灰度21～25用黃色顯示、灰度26～30用綠色顯示等。一般可呈現(xiàn)數(shù)十種顏色。也可以將灰度11～20用深紅色顯示、灰度21～30用淡紅色顯示、灰度31～40用藍(lán)色顯示等，由操作者隨心所欲加以編輯。這種圖像如拍攝下來，旁邊顯示出一條彩色帶，表明什么顏色代表什么范圍的灰度，如此可將一種顏色的免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本轉(zhuǎn)換成多種彩色的，對比鮮明的照片?！　∮行﹫D像分析儀中帶有光密度計組件，光密度計能將掃描器視頻信號變換成對數(shù)等值，然后數(shù)值化，就能用絕對光密度單位來校正。因此，光密度計把被測物的積分光密度作為主要輸出，所謂積分光密度即各個單獨探測的像素密度分布的總和。因為容易得到被測物的面積，也就很容易求出平均密度。光密度在細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)的定量領(lǐng)域內(nèi)極為有用?；叶仁且环N相對值，因為你可將標(biāo)本上的灰度隨你編輯分為64級、也可將其分為128級或者256組，而光密度是絕對值。在文獻(xiàn)中光密度常用OD表示（optical density）。有的單位購置了圖像分析儀后才發(fā)現(xiàn)不能作光密度測量，但已無法再去掉換，所以在購買前必須詳細(xì)了解其性能，包括屏幕像素數(shù)、有無光密度計組件等?！　。ǘ╅L度　　形狀不規(guī)則的線形組織結(jié)構(gòu)，一般方法很難計算出其長度，如組織中的毛細(xì)血管，神經(jīng)纖維、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)中的各種膜性結(jié)構(gòu)等，以往常用排列稀疏或密度集等詞描述，圖像分析儀則可測出各種圖像周界線的長度。例如：在活檢組織的子宮頸上皮細(xì)胞的電子顯微鏡照片上，測出在一定范圍的細(xì)胞膜長度為8128像素，橋粒長度為1229像素，計算出橋粒長度占細(xì)胞膜總長度的15%，wiernik等用此方法觀察到癌細(xì)胞的橋粒值遠(yuǎn)小于正常細(xì)胞，提出這可能與癌細(xì)胞易于失去相互間的的細(xì)胞連接，從而形成轉(zhuǎn)移有關(guān)。用免疫細(xì)胞化學(xué)法顯示的神經(jīng)纖維，在局部組織中可能出現(xiàn)縱橫交錯的復(fù)雜圖像，用圖像分析儀可獲得單位面積內(nèi)神經(jīng)纖維的總長度。又如去甲腎上腺素神經(jīng)纖維呈串珠樣，如果測出一定范圍內(nèi)神經(jīng)纖維總長度及局部膨大數(shù)目，即可計算出串珠平均間隔距離，比較精確?！　。ㄈ┟娣e　　無論是在光鏡或電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本的觀察中，都要涉及有關(guān)標(biāo)本中某些結(jié)構(gòu)的面積問題。即使是極不規(guī)整的結(jié)構(gòu)，用圖像分析法容易算出其面積。在一定的放大倍數(shù)下，每μm2中含多少像素可以測出，畫出待測結(jié)構(gòu)的輪廓，在所勾畫的范圍內(nèi)含多少像素是立即可顯示出來的，這樣，很快可算出面積的數(shù)值。例如免疫電鏡技術(shù)中的鐵蛋白法、膠體金法等，可用上述方法進(jìn)行單位面積中反應(yīng)產(chǎn)物顆粒的計數(shù)，可進(jìn)行各種實驗條件的比較?！　≡腥嗽诟闻K切片上進(jìn)行圖像分析，在一定范圍內(nèi)所有細(xì)胞核的總面積顯示為51554像素，其中肝細(xì)胞核總面積為27431像素，可知肝細(xì)胞核占全部細(xì)胞核總面積的53%。　　四、圖像分析儀工作程序　　使用者對硬件不需操縱，它們可完成復(fù)雜的運行過程，完整的計算機軟件可按實際需要使其執(zhí)行功能。對操作者來說，圖像分析儀的實際操作很少，幾乎完全是通過一個稱為光電鼠標(biāo)（mouse）的附件來操縱的。計算機屏幕上顯示出多項指令，可由光電鼠標(biāo)來指明你所需要的程序，光電鼠標(biāo)可控制計算機屏幕上的一個光標(biāo)，移動光電鼠標(biāo)也隨著移動，將光標(biāo)移到計算機屏幕上顯示的某項功能的區(qū)域內(nèi)，就表示選擇了該項功能，可以開始工作，極簡便。圖91為圖像分析儀的簡化圖?！　D像分析儀主要包括輸入（input）、中央信息處理機（central processor）和輸出（output）三大部分。實際上，工作程序并不是一成不變的，后面的步驟的信息常會反饋到前面，于是又重復(fù)前面的程序，具體步驟如下：　　1．標(biāo)本成像　移動標(biāo)本使需要觀察的部位在電視攝像機上得到適當(dāng)放大的圖像，標(biāo)本包括組織切片或電鏡照片或照相底片等。　　2．圖像獲取　用電視攝像機或其他方法將圖像轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?，在此過程中，攝像機的性能極重要，不能使用那些便宜的適用于監(jiān)視的電視攝像機，一定要用使圖像具有很好的清晰度的攝像機?！　?．加強圖像　加強電子圖像（electronic image）使其更適合于分析?！　?．檢測檢測（detection ）是圖像分析過程中設(shè)法從圖像中確定并且分離出需要分析灰度相的步驟，“相（phase）”是圖像中我們想要測量的部分的總稱。檢測是通過選擇一定的閾值來完成的，如果所需相比背景暗，那么所有暗于下限的東西都被選，例如相的灰度是20～50，20是下限，50是上限，背景的灰度小于20，檢定時暗于灰度20的東西都被選。如果所需相比背景亮，如免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的標(biāo)本，那么亮于上限的東西都被選。如果所需相比背景亮，如免疫熒光化學(xué)技術(shù)的標(biāo)本，那么亮于上限的東西都被選，例如相的灰度是5～20，5是下限，20是上限，背景灰度大于20，所謂上限既指比灰度20淺的亦即灰度20以下的相被選，而背景是暗于上限的，不被選作測量。如果相暗于圖像某些部分而又亮于圖像的另一些部分，那就要在二限之間的部分選擇灰度了?！　≡跈z測過程中要使用圖像框（image frame）和測量框（measurement frame）。檢測只在圖像框內(nèi)進(jìn)行，框的大小按需要而定，測量框在圖像之內(nèi)，是進(jìn)行測量的部位。兩個框之間的部分稱為保險區(qū)（圖92）。　　圖像中每個被測物都有其特有的特征計算點（feature count point, FCP）,FCP在被測物的最底點，如圖92中上面10個被測物的FCP均在測量框內(nèi)，可計數(shù)或作其他測量，而最下面2個被測物的FCP不在測量框內(nèi)，則不計在內(nèi)，在測其他區(qū)域時再計算，有的被測可能被測量框截斷，那么測量框外的那部分被測物應(yīng)該位于保險區(qū)，即保險區(qū)要大于被測物，才能觀察FCP是否在測量框內(nèi)而決定取舍。這樣當(dāng)換到相鄰的區(qū)域進(jìn)行測量時，不會使某圖形重復(fù)測量，可避免測量誤差，圖93顯示放置標(biāo)本的顯微鏡載物臺的移動方式，可由計算機控制，用編制好的程序，使載物臺按一定方式移動，也可以人工操作。圖中可以看出每個部位都將通過測量框，不會遺漏。圖92　示測量框位置，圖中有10個被測物的FCP在測量框內(nèi)　　5．陰影校正校正圖像細(xì)節(jié)　直到正確無誤并達(dá)到能被測量的要求。所謂陰影（shading）是指人眼看來是均勻的視場內(nèi)存在著不均勻的電子反應(yīng)，這使得灰度相同的圖像成分由于在視場中所處位置不同而顯示出不同的灰度，這種影響必須校正才能使圖像得到準(zhǔn)確測量。陰影有三個主要的來源：　?。?）圖像源的不均勻的光照?！　。?）穿過透鏡時光路發(fā)生變化引起的透鏡陰影。　?。?）顯像管本身的圖像靈敏度差異引起的掃描陰影。]　　任何圖像分析在具體運用中都有這些陰影存在，前二者可通過精密安裝圖像分析儀來控制，后者可通過對顯像管的質(zhì)量嚴(yán)格篩選來減少影響。陰影可貯存起來，并且在每上次掃描時同步地從圖像信號中去掉。圖93?。?；；　　6．測量經(jīng)以上各步驟后，可以用圖像分析儀的計算機對圖像進(jìn)行測量來取得所需的參數(shù)，如灰度、面積、長度、個數(shù)等。原始的參數(shù)可由計算機轉(zhuǎn)化成容易理解的數(shù)值，例如面積可由某圖形所占像素數(shù)轉(zhuǎn)化為平方微米，使觀察者容易理解。