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免疫細(xì)胞化學(xué)與圖像分析-免費(fèi)閱讀

2025-07-03 22:33 上一頁面

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【正文】 四是帶頭警示行為。二是帶頭接受監(jiān)督?! 〉聡鳯eitz公司制造Leitz ,圖像輸入裝置是一臺(tái)Leitz Orthplan顯微鏡,該儀器還包括一臺(tái)TU—58雙盒式磁帶機(jī),可用于存貯程序、數(shù)據(jù)、圖像。最使研究工作者感興趣的是該儀器中設(shè)有坐標(biāo)發(fā)生器,能使被檢圖像的坐標(biāo)數(shù)據(jù)通過臺(tái)式計(jì)算機(jī)在輸出打印機(jī)上打印出來。MIAS系列圖像分析儀的軟件系統(tǒng)是在DOS(磁盤操作系統(tǒng)),全部采用C語言和匯編語言(80286宏匯編,TMS340系列專用匯編)進(jìn)行編程,共98個(gè)功能模塊。圖像采集速度:,慢速高精方式2~10秒/幀?! “?、國內(nèi)外生產(chǎn)圖像分析儀的情況簡介  (一)國內(nèi)情況  80年代初,以IBM—PC為代表的個(gè)人計(jì)算機(jī)得到了突飛猛進(jìn)的大發(fā)展和在普及;緊接著各種功能強(qiáng)大面向圖像處理與分析的專用超大規(guī)模(VLSI)蕊片或單板達(dá)到商品化水平,兩者的結(jié)合,為微機(jī)圖像處理系統(tǒng)的問世奠定了硬件基礎(chǔ)。常用的符號(hào)如下:  P測試點(diǎn)數(shù)  P1單位測試線長上的交點(diǎn)數(shù)  Pa單位測試面積上的點(diǎn)數(shù)  Pv單位測試體積上的點(diǎn)數(shù)   L測試線長  L1單位測試線長上的截距  La單位測試面積上線的單元長  Lv單位測試體積上線的單元長  A測試面積  S表面積  Aa單位測試面積上被測物的面積  Sv單位測試體積內(nèi)被測物的表面積  V體積  Vv單位測試體積內(nèi)被測物的體積  N被測物數(shù)目  N1 單位測試線長上與被測物相交的數(shù)  NA單位測試線長上與被測物的數(shù)  Nv單位測試體積內(nèi)被測物的數(shù)  用測試網(wǎng)格的體視學(xué)方法,楊光等,1987年曾對(duì)腹腔神經(jīng)節(jié) 小強(qiáng)熒光細(xì)胞進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)的定量分析,測量了線粒體、溶酶體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、顆粒小泡的Vv、Sv、Na、Nv等參數(shù),得出了標(biāo)準(zhǔn)小強(qiáng)熒光細(xì)胞的計(jì)量值。  體積密度(volume density):在單位包容空間內(nèi),某相的體積?! 〗M分(ponent):在結(jié)構(gòu)中能被截然分開而且能被辨認(rèn)的部分。由此可大致體現(xiàn)我國在此領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀?! ∥覈?991年11月出版的“計(jì)量學(xué)在形態(tài)學(xué)研究中應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集“共收集論文123篇,其中有關(guān)免疫細(xì)胞化學(xué)與計(jì)量學(xué)結(jié)合的論文共8篇:①大鼠燙傷后下丘腦室旁核和視上核內(nèi)AVP含量變化的形態(tài)學(xué)計(jì)量(第二軍醫(yī)大學(xué)張忠義等)用圖像分析儀測定AVP陽性反應(yīng)物的面積?! cmillan等1983年在第六屆國際體視學(xué)會(huì)議上曾報(bào)告了“用圖像信息處理機(jī)客觀評(píng)定免疫組織化學(xué)染色的組織”,闡明了當(dāng)組織與第一抗體作用時(shí),不斷攪動(dòng)血清,明顯提高了免疫反應(yīng)。在生物組織中,如皮膚的表皮、各種上皮的外表面均可作為水平面,只要與水平面垂直的各個(gè)方向所切的切片均為垂直切片。P=d/260=30d。如果某一個(gè)細(xì)胞的電鏡照片作為參照面,線粒體作為特征物,欲測單位面積電鏡照片內(nèi)線粒體斷面周界線的長度,可用以下公式:  SV=2IL  SV表面積密度2IL交點(diǎn)密度  IL=測線與特征物斷面周界線之間的交叉點(diǎn)數(shù)除以參照面內(nèi)測線總長度。也可將94復(fù)印在較大的透明膠片上,可用來測量電鏡照片或光鏡照片,將透明膠片疊加在照片上即可進(jìn)行測量?! ∮镁W(wǎng)格測量的具體操作舉例:圖94為一關(guān)聯(lián)方測格,由于測點(diǎn)、測線、測面之間有互相關(guān)聯(lián)的關(guān)系,故稱為關(guān)聯(lián)方測格。③在25個(gè)視場內(nèi)取25個(gè)點(diǎn)的著色強(qiáng)度進(jìn)行分級(jí)。  五、沒有圖像分析儀可否進(jìn)行圖像分析?  當(dāng)沒有圖像分析儀時(shí),研究者早已想到用網(wǎng)格來進(jìn)行圖像分析,也獲得了客觀的評(píng)定結(jié)果。原始的參數(shù)可由計(jì)算機(jī)轉(zhuǎn)化成容易理解的數(shù)值,例如面積可由某圖形所占像素?cái)?shù)轉(zhuǎn)化為平方微米,使觀察者容易理解。圖92 示測量框位置,圖中有10個(gè)被測物的FCP在測量框內(nèi)  5.陰影校正校正圖像細(xì)節(jié) 直到正確無誤并達(dá)到能被測量的要求。如果所需相比背景亮,如免疫熒光化學(xué)技術(shù)的標(biāo)本,那么亮于上限的東西都被選,例如相的灰度是5~20,5是下限,20是上限,背景灰度大于20,所謂上限既指比灰度20淺的亦即灰度20以下的相被選,而背景是暗于上限的,不被選作測量。圖91為圖像分析儀的簡化圖?! 。ㄈ┟娣e  無論是在光鏡或電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)本的觀察中,都要涉及有關(guān)標(biāo)本中某些結(jié)構(gòu)的面積問題。光密度在細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)的定量領(lǐng)域內(nèi)極為有用。彩色有兩種情況:在屏幕上出現(xiàn)與標(biāo)本一樣的顏色稱為真色(real color),如果將不同的灰度轉(zhuǎn)換成不同的顏色則稱為假色(pseudo color),應(yīng)用假色的目的是增強(qiáng)對(duì)比度,來改善對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的視覺識(shí)別,同時(shí)可增強(qiáng)輪廓用來強(qiáng)調(diào)結(jié)構(gòu)的細(xì)節(jié) ?! ∪?、常用的測量方法  (一)灰度  灰度(grey level)指圖像各種分顏色的深淺程度。圖91 圖像分析系統(tǒng)簡圖  有關(guān)圖像分析的學(xué)術(shù)活動(dòng),1963年召開了第一屆國際討論會(huì),此后每四年有一次國際學(xué)術(shù)交流活動(dòng)。圖像中包含著極其豐富的內(nèi)容,是人們從客觀世界中獲得信息的重要手段,因此,正確地測量和處理圖像已成為測量技術(shù)中的重要課題,并廣泛應(yīng)用于航空遙感測量、金屬圖像測量、微電子技術(shù)中微圖形檢測、精密機(jī)件尺寸檢測,光波干涉圖、醫(yī)學(xué)生物學(xué)的研究及應(yīng)用等有關(guān)領(lǐng)域中。所謂反應(yīng)產(chǎn)物的“量”包括顏色深淺,其所占的長度或面積等,就要借助于圖像分析儀(image analyzer)了。講政治紀(jì)律,就是要堅(jiān)持黨的基本理論、基本路線不動(dòng)搖,在政治上同黨中央保持一致,保證中央的政令暢通。一是作為領(lǐng)導(dǎo)干部一定要樹立正確的權(quán)力觀和科學(xué)的發(fā)展觀,權(quán)力必須為職工群眾謀利益,絕不能為個(gè)人或少數(shù)人謀取私利。黨員必須在行動(dòng)上服從,決不允許公開發(fā)表同中央的決定相反的言論,決不允許散布同黨的路線方針政策相反的意見,決不允許制造、傳播政治謠言,決不允許有令不行,有禁不止,搞“上有政策,下有對(duì)策”。  以往我們對(duì)免疫細(xì)胞化學(xué)或一般組織化學(xué)光鏡標(biāo)本的觀察,對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物的量常用“+”號(hào)表示,一般可分為0~+++,共五個(gè)等級(jí),這種方法對(duì)差別較大的標(biāo)本當(dāng)然還是可以用的,但存在以下三方面的問題:①同一張標(biāo)本,不同的觀察者可以得到出不同的結(jié)論,因?yàn)檫@種分級(jí)沒有明確的客觀標(biāo)準(zhǔn);②即使同一張標(biāo)本同一個(gè)觀察者,間隔若干天后進(jìn)行再次觀察時(shí),可能結(jié)論也不一樣的;③最后一點(diǎn)也是最重要的一點(diǎn),人的視覺是有一定限制的,用一般觀察法實(shí)際上已經(jīng)丟失掉了許多可貴的信息,因?yàn)槟悴煊X不到實(shí)際上存在的較小的差異。圖像測量將會(huì)隨著信息科學(xué)和人工智能的發(fā)展而日益顯示其重要作用。1983年在美國召開了第六屆國際學(xué)術(shù)會(huì)議,與會(huì)代表約150人。比較高級(jí)的圖像分析儀可將灰度分成為256級(jí),也有的只能將灰度分成64級(jí),總之都是2n,24是26256是28。例如,免疫細(xì)胞化學(xué)中常用的非標(biāo)記抗體過氧化物酶—抗過氧化物酶法,最終反應(yīng)產(chǎn)物呈棕色,假設(shè)在腦內(nèi)某核團(tuán)的許多細(xì)胞中,呈現(xiàn)出不同深度的棕色,深淺差別較大者顯示在屏幕上人眼還能區(qū)別,若差別小的則不易區(qū)別了,操作者可將灰度11~15用紅色顯示,灰度16~20用藍(lán)色顯示、灰度21~25用黃色顯示、灰度26~30用綠色顯示等?;叶仁且环N相對(duì)值,因?yàn)槟憧蓪?biāo)本上的灰度隨你編輯分為64級(jí)、也可將其分為128級(jí)或者256組,而光密度是絕對(duì)值。即使是極不規(guī)整的結(jié)構(gòu),用圖像分析法容易算出其面積。  圖像分析儀主要包括輸入(input)、中央信息處理機(jī)(central processor)和輸出(output)三大部分。如果相暗于圖像某些部分而又亮于圖像的另一些部分,那就要在二限之間的部分選擇灰度了。所謂陰影(shading)是指人眼看來是
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