流式細(xì)胞技術(shù)與圖像處理(更新版)
【正文】 分選； ? 進(jìn)樣管道較長，需要保持無菌狀態(tài)，所以分選型流式細(xì)胞儀一般只用于分選，不兼單純分析。 流式細(xì)胞儀 特點(diǎn) 單細(xì)胞懸液或生物顆粒 分析速度高 多參數(shù) 精度高 當(dāng)代最先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù) 流式細(xì)胞儀的分類 ? 分析型 流式細(xì)胞儀 ? 細(xì)胞樣本分析后最終進(jìn)入廢液桶，不能回收利用。 發(fā)射波長 (熒光波長 ) Emission wavelength 激發(fā)波長 Excitation wavelength ＜ Longpass Shortpass Bandpass 460 500 540 460 500 540 460 500 540 SP 500 LP 500 BP500/50 光收集系統(tǒng)：濾光片 電子數(shù)據(jù)系統(tǒng) 電子數(shù)據(jù)系統(tǒng)構(gòu)成： ? 光電檢測器 將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電子信號(hào)。 流式細(xì)胞分析的信息 —— 光信號(hào)檢測 流式細(xì)胞的基本信息 : “形態(tài)” 散射光的作用 ? 實(shí)驗(yàn)中，常利用 FSC和 SSC這兩種參數(shù)的組合，區(qū)分不同的細(xì)胞群體，去除碎片、死細(xì)胞和粘連細(xì)胞的干擾。 樣品制備 1000rpm 5分鐘 收集 2X106個(gè)細(xì)胞 PBS漂洗 兩次 70%酒精 4度固定過夜 收集固定的細(xì)胞 PBS漂洗 PBS 懸浮細(xì)胞 10μg/μl RNase A 37℃ 消化 1小時(shí) 過 300目細(xì)胞篩 50μl （含 1%Triton)， 1000rpm5分鐘 離心 兩次 混勻，室溫 靜止 5分鐘 上機(jī) DNA 流式檢測的主要指標(biāo) ? DNA 含量 : ploidy： 細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA含量 DI： 測定標(biāo)本的 G0/G1期細(xì)胞 DNA含量與同種系正常細(xì) 胞的 G0/G1期細(xì)胞 DNA含量的比值，表示細(xì)胞倍體性 ? PI： 增殖細(xì)胞占總周期細(xì)胞的比例 ? CV： G0/G1期細(xì)胞 DNA含量變異系數(shù) Annexin V Assay （建議用于懸浮細(xì)胞） 在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸 (PS)位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，一旦發(fā)生細(xì)胞凋亡，可以從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)迅速翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜外側(cè)，使得 PS 暴露在細(xì)胞
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