流式細(xì)胞技術(shù)與圖像處理(編輯修改稿)
2025-06-20 11:57 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 的熒光，比自發(fā)熒光強(qiáng)很多倍。 流式細(xì)胞分析的信息 —— 光信號檢測 流式細(xì)胞的基本信息 : “形態(tài)” 散射光的作用 ? 實驗中，常利用 FSC和 SSC這兩種參數(shù)的組合，區(qū)分不同的細(xì)胞群體，去除碎片、死細(xì)胞和粘連細(xì)胞的干擾。 粒細(xì)胞 單核細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 紅細(xì)胞、死細(xì)胞和碎片 流式細(xì)胞的主要信息 :Fluorescence ?FL1 ?FL2 ?FL3 ?FL4 最常用的標(biāo)記方法是熒光素分子標(biāo)記的抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合 ? Forward scatter (FSC) ? Side scatter (SSC) ? FL1綠色 ? FL2黃色 、 橙色 ? FL3紅色 ? FL4紅色 488 FL1 BP 530/30 515545nm FITC（綠色， 520nm） FL2 BP 585/42 564606nm PE（黃色， 575nm） FL3 670 LP ﹥ 670nm PECy PerCP、 PECy7（紅色） 635 FL4 BP 661/16 653669nm APC（紅色， 660nm） 流式常見圖形 (Histogram Plot) 適用于：單參數(shù)分析 DNA倍體分析 抗原表達(dá)分析 流式常見圖形 (Dot Plot) 散點圖 偽彩圖 假三維圖和三維圖 Counts SSC → 等高圖和密度圖 ? 等高圖：類似于地圖中的等高線，同一條線上的細(xì)胞數(shù)目相等，越在里面的曲線代表細(xì)胞數(shù)目越多。 ? 密度圖：點密度越大的地方細(xì)胞越多，點密度越小的地方細(xì)胞少。 設(shè)門與數(shù)據(jù)分析 ? 門 (Gate，簡寫 G)是流式細(xì)胞術(shù)中的一個重要術(shù)語， FCM數(shù)據(jù)分析過程實際上就是選門和設(shè)門的過程。 橢圓形 圓形 十字門 線性門 流式分選 電荷式 分選 ?超聲振動器 (15100kHz) ?液流充電系統(tǒng) ?高壓偏轉(zhuǎn)板 ?收集裝置 (流式管、培養(yǎng)板 ) lasers 斷裂點 (充電 ) 高壓偏轉(zhuǎn)板 第二節(jié) 流式細(xì)胞術(shù)的科研應(yīng)用 ?分析群體細(xì)胞 ?所需時間短 ?多參數(shù)分析 ?定性或定量 流式應(yīng)用常見范圍 ? 細(xì)胞大小 ? 細(xì)胞的顆粒度 ? 細(xì)胞表面分子： CD 系列等 ? 細(xì)胞漿內(nèi)分子：胞內(nèi)細(xì)胞因子等 ? 細(xì)胞核內(nèi)分子： P53 ? 細(xì)胞功能檢測：細(xì)胞周期、凋亡、 PH、Ca++、細(xì)胞活性等
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