流式細(xì)胞技術(shù)與圖像處理-wenkub
2023-05-26 11:57:54 本頁面
【正文】 、細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的一種新型高科技儀器。 ? 流體動(dòng)力學(xué)聚焦：穩(wěn)定的液流從截面積較大的部分流入截面積較小的部分后，有一個(gè)聚焦收縮作用，細(xì)胞流直徑被約束在 1020um，避免了多個(gè)細(xì)胞重疊進(jìn)入檢測區(qū)。 光學(xué)原理 散射信號(hào) 與 熒光信號(hào) 熒光信號(hào) 物質(zhì)中的電子吸收光的能量由低能狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時(shí)釋放出的光。 ? 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 計(jì)算機(jī)系統(tǒng)數(shù)據(jù)采集、分析。 ? 側(cè)向散射光 (side scatter, SSC). ? 熒光信號(hào) ? 自發(fā)熒光 ：微弱 ? 特異熒光：標(biāo)記的熒光素分子發(fā)出 的熒光，比自發(fā)熒光強(qiáng)很多倍。 設(shè)門與數(shù)據(jù)分析 ? 門 (Gate，簡寫 G)是流式細(xì)胞術(shù)中的一個(gè)重要術(shù)語， FCM數(shù)據(jù)分析過程實(shí)際上就是選門和設(shè)門的過程。通過流式檢測就能反映細(xì)胞內(nèi) DNA的含量，區(qū)分細(xì)胞周期的 G0/G1期、 S期和 G2/M期細(xì)胞比例。 PI 被用來區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞。 Annexin VFITC PI 活細(xì)胞 早期凋亡 晚期凋亡壞死細(xì)胞 裸核 。 Annexin VFITC/ PI雙染色法 雙陰：活細(xì)胞 Annexin VFITC單陽：早期凋亡細(xì)胞 雙陽：晚期凋亡細(xì)胞 PI 單陽：壞死細(xì)胞 PI常用于鑒別死細(xì)胞。 在 Ca2+存在時(shí)， Annexin V 與 PS 有很高的親和力，可與之迅速結(jié)合。 （特別在檢測陰性時(shí)） 流式檢測應(yīng)用實(shí)例 ?細(xì)胞表面、細(xì)胞內(nèi)分子檢測 ?細(xì)胞周期分析 ?細(xì)胞凋亡分析 淋巴細(xì)胞表面抗原分析 ? 樣本來源 ? 新鮮抗凝全血 ? PBMC ? 單克隆熒光抗體染色 ? 溶血 ? 洗細(xì)胞 ? 固定 ? 上機(jī)檢測 淋巴細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)抗原分析 ? 樣本來源 ? 新鮮抗凝全血 ? PBMC ? 細(xì)胞表面抗體染色 ? 溶血、固定 ? 細(xì)胞打孔 ? 細(xì)胞內(nèi)抗體染色 ? 上機(jī)檢測 細(xì)胞周期分析： G1 M G2 S Quiescent cells G0 ? 處于不同細(xì)胞周期的細(xì)胞 DNA含量不同，G0/G1期細(xì)胞含有 二倍體 量的 DNA， G2/M期細(xì)胞含有 四倍體 量的 DNA，而 S期細(xì)胞 DNA含量處于 二倍體和四倍體量之間 。 粒細(xì)胞 單核細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 紅細(xì)胞、死細(xì)胞和碎片
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