流式細胞技術與圖像處理(完整版)
【正文】 ，樣本細胞流位于軸心穩(wěn)定流動，外面包裹有鞘液 (sheath)。 流式細胞儀簡介 流式細胞儀 （ Flow Cytometer ）是集細胞與分子生物學、流體力學、激光技術、光電子技術、計算機技術、細胞熒光化學技術、單克隆抗體技術為一體的一種新型高科技儀器。 光學原理 散射信號 與 熒光信號 熒光信號 物質中的電子吸收光的能量由低能狀態(tài)轉變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時釋放出的光。 ? 側向散射光 (side scatter, SSC). ? 熒光信號 ? 自發(fā)熒光 ：微弱 ? 特異熒光：標記的熒光素分子發(fā)出 的熒光，比自發(fā)熒光強很多倍。通過流式檢測就能反映細胞內 DNA的含量，區(qū)分細胞周期的 G0/G1期、 S期和 G2/M期細胞比例。 Annexin VFITC PI 活細胞 早期凋亡 晚期凋亡壞死細胞 裸核 。 在 Ca2+存在時， Annexin V 與 PS 有很高的親和力，可與之迅速結合。 粒細胞 單核細胞 淋巴細胞 紅細胞、死細胞和碎片 流式細胞的主要信息 :Fluorescence ?FL1 ?FL2 ?FL3 ?FL4 最常用的標記方法是熒光素分子標記的抗體與細胞抗原結合 ? Forward scatter (FSC) ? Side scatter (SSC) ? FL1綠色 ? FL2黃色 、 橙色 ? FL3紅色 ? FL4紅色 488 FL1 BP 530/30 515545nm FITC（綠色， 520nm） FL2 BP 585/42 564606nm PE（黃色， 575nm） FL3 670 LP ﹥ 670nm PECy PerCP、 PECy7（紅色） 635 FL4 BP 661/16 653669nm APC（紅色， 660nm） 流式常見圖形 (Histogram Plot) 適用于：單參數(shù)分析 DNA倍體分析 抗原表達分析 流式常見圖形 (Dot Plot) 散點圖 偽彩圖 假三維圖和三維圖 Counts SSC → 等高圖和密度圖 ? 等高圖：類似于地圖中的等高線，同一條線上的細胞數(shù)目相等，越在里面的曲線代表細胞數(shù)目越多。 ? 前置放大電路 將信號等比例放大，輸出電脈沖信號。 ? 分選型 流式細胞儀 ? 既能流式分析，還能對分析的目的細胞進行
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