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免疫組化、免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用比較及常見問題分析-在線瀏覽

2024-10-03 13:52本頁面
  

【正文】 原理及選擇 4. 直接酶標(biāo)二抗法 該法是將 HRP/AP酶分子直接標(biāo)記于二抗上。實(shí)驗(yàn)簡單,本錢低,但是因?yàn)闆]有信號放大作用,所以對很多表達(dá)豐度不是很高的抗原就可能檢測不到。 IHC常用酶標(biāo)二抗原理示意圖 第九頁,共三十五頁。本試劑盒適用于辣根過氧化物酶〔 HRP〕系統(tǒng)的免疫組化顯色,包括AEC顯色原和與之配套的稀釋液。本試劑盒適用于辣根過氧化物酶〔 HRP〕系統(tǒng)的免疫組化顯色。 試劑盒組成: 有機(jī)溶劑中的 5溴 4氯 3吲哚磷酸和氮藍(lán)四唑 IHC顯色方法原理及選擇 4. BCIP/INT顯色法 產(chǎn)品描述: BCIP/INT〔 5溴 4氯 3吲哚磷酸 /p碘硝基四唑〕是一種冷藏穩(wěn)定的、單一組分溶液,用于免疫組化、原位雜交、 western blot、 northern blot和 southern blot,特異性地與堿性磷酸酶反響生成橙色 /棕褐色物質(zhì)。 免疫組織化學(xué)結(jié)果分析 第十一頁,共三十五頁。 ?操作過程中沖洗不充分,建議增加沖洗的次數(shù)與沖洗時間。 ?發(fā)生抗原異位。 ?一抗?jié)舛冗^高或孵育時間過長,建議降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時間。 ?HRP標(biāo)記二抗孵育時間過長,建議縮短時間。 ?試劑超過保質(zhì)期,建議實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)試劑的保質(zhì)期。 免疫組織化學(xué)常見問題分析 ?組織中無目的抗原的表達(dá)。 ?顯色物質(zhì)與 HRP系統(tǒng)不匹配,建議實(shí)驗(yàn)前確認(rèn)顯色體系。 免疫熒光原理及特點(diǎn) 免疫熒光就是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合原理及特殊的熒光素標(biāo)記技術(shù),通過激光激發(fā)使熒光素發(fā)出熒光,在熒光顯微鏡下觀察熒光的變化從而對細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行分析的技術(shù)。 免疫熒光具有特異性強(qiáng)、敏感性高、速度快等特點(diǎn)。 免疫熒光原理示意圖 第十四頁,共三十五頁。 免疫熒光結(jié)果分析 第十六頁,共三十五頁。 間接法: ?一抗種屬來源來源不同 ?二抗分別標(biāo)記不同熒光素。 細(xì)胞核襯染染料: DAPI是一種能夠與 DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料它可以透過完整的細(xì)胞膜,因此以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。 Hoechst 33342 是一種 DNA結(jié)合型熒光染料 ,可以嵌合到堿基分子中 ,在紫外激發(fā)光作用下發(fā)出蘭色熒光 .能夠透過完整的細(xì)胞膜,可用于活細(xì)胞染色。盡管 PI不能通過活細(xì)胞膜,但卻能穿過破損的細(xì)胞膜而對核染色。 細(xì)胞漿襯染染料: 鬼筆環(huán)肽〔 phalloidin 〕由鬼筆鵝膏真菌〔 Amanita phalloides〕產(chǎn)生的一種環(huán)肽。其熒光標(biāo)記物是鑒定 F肌動蛋白的重要試劑。 紅色熒光素: PE, Alex546等。 無目的蛋白或表達(dá)量極少,建議選用表達(dá)量高的細(xì)胞或組織。 一抗 /二抗?jié)舛忍?,建議增大其濃度。 ?一抗質(zhì)量不高,建議使用特異性高、效價高的一抗。 ?封閉不完全,建議增加蛋白封閉時間。 ?可通過調(diào)節(jié)熒光顯微鏡的參數(shù)來減低背景。 ?用普通的封片劑封片,建議選用防熒光猝滅劑封片。 材料本身〔如石蠟〕有自發(fā)熒光,建議設(shè)立陰性對照,通過降低熒光顯微鏡的參數(shù)來消除背景染色。 流式細(xì)胞術(shù)定義及原理 流式細(xì)胞儀〔 FLOW CYTOMETOR〕: 進(jìn)行流式細(xì)胞分析的儀器,是集光電子物
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【摘要】免疫組織化學(xué)抗體手冊目錄;807)D17、18、19