工業(yè)微生物菌種保藏技術(shù)(ppt52)-工藝技術(shù)-在線瀏覽
2024-10-19 21:15本頁(yè)面
【正文】 C) 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院抗菌素研究所 , 北京 (IA),100050 四川抗菌素工業(yè)研究所 , 成都 (SIA), 610051: 新抗菌素菌種 華北制藥廠抗菌素研究所 , 石家莊 (IANP),050015: 生產(chǎn)用抗菌素菌種 6. 獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心 (CVCC) 農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 , 北京 (CIVBP),100081 7. 林業(yè)微生物菌種保藏管理中心 (CFCC) 中國(guó)林業(yè)科學(xué)院 , 北京 (CA F ),100 09 1 二、工業(yè)微生物菌種保藏技術(shù) (1)超低溫或在液氮中冷凍保藏； (2)冷凍干燥或真空干燥保藏； (3) 轉(zhuǎn)接培養(yǎng)或斜面?zhèn)鞔２兀? (4)土壤或陶瓷珠等載體于燥保藏。 通過(guò)冷凍 ， 使微生物代謝活動(dòng)停止 。 為了獲得滿意的冷凍結(jié)果 ， 通常應(yīng)在培養(yǎng)物中加入一定的 冷凍保護(hù)劑 。 冷凍深藏的缺點(diǎn)之一是培養(yǎng)物運(yùn)輸較困難 ?；蛘?， 將菌種培養(yǎng)在小的試管或培養(yǎng)瓶斜面上 ， 待生長(zhǎng)適度后 ， 將試管或瓶口用橡膠塞嚴(yán)格封好 ， 同上置于冰箱中保存 。 應(yīng)注意的是經(jīng)過(guò)一次解凍的菌株培養(yǎng)物不宜再用來(lái)保藏 。 這一方法雖簡(jiǎn)便易行 ， 但不適宜多數(shù)微生物的長(zhǎng)期保藏 。 在超低溫冷藏柜中保藏菌種的一般方法是： 1． 離心收獲對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期至后期的微生物細(xì)胞； 2． 用新鮮培養(yǎng)基重新懸浮所收獲的細(xì)胞； 3． 加入等體積的 20％ 甘油或 10％ 二甲亞砜； 4． 混勻后分裝入冷凍指管或安瓿中 ， 于 70℃ 超低溫冰箱中保藏 。超低溫冰箱的冷凍速度一般控制在 12℃ ／ min。 三、液氮冷凍保藏技術(shù) (一 )冷凍保護(hù)劑 在液氮冷凍保藏中 ， 最常用的冷凍保護(hù)劑是二甲亞砜和甘油 ， 最終使用濃度一般為甘油10％ 、 二甲亞砜 5％ 。 (二 )液氮冷凍保藏微生物菌種的步驟 1．待冷凍保藏菌種懸液的制備 (1)從生長(zhǎng)斜面制備菌懸液：每一斜面加入 5ml含10％甘油的營(yíng)養(yǎng)液體培養(yǎng)；用巴氏吸管吹吸斜面制成孢子及菌體細(xì)胞懸液； ～ lml分裝玻璃安瓿或液氮冷藏專用塑料瓶。 2． 控速冷凍 ． (1)將安瓿或液氮瓶置于鋁盒或布袋中 ， 然后置于一較大的金屬容器中； (2)將此金屬容器置于控速冷凍機(jī)的冷凍室中； (3)以 12℃ /min的致冷速度降溫 ， 直到溫度達(dá)到相對(duì)溫度之上幾度的細(xì)胞凍結(jié)點(diǎn) (通常為 30℃ )； (4)補(bǔ)加一定量的液氮至系統(tǒng)中 ， 使細(xì)胞在凍結(jié)點(diǎn)時(shí)盡可能快地發(fā)生相變； (5)細(xì)胞凍結(jié)后 ， 將致冷速度降為 1℃ /min， 直到溫度達(dá) 50℃ ； (6)將安瓿迅速移入液氮罐中于液相 (196℃ )或 氣相 (156℃ )中保存 。 (三 )復(fù)蘇 1． 從液氮罐中取出所需的安瓿 ， 立即置于冰浴中； 2． 迅速將安瓿置于 3740℃ 水浴中 ， 并輕輕搖動(dòng)以加速解； 3．用巴氏吸管將安瓿中貯存培養(yǎng)物移接入含有2m1無(wú)菌液體培養(yǎng)基的試管中，用同一支吸管反復(fù)抽吸數(shù)次，然后取 (約 8滴 )轉(zhuǎn)接入瓊脂斜面上。此法是微生物菌種長(zhǎng)期保藏的最為有效的方法之一 。 大部分微生物菌種可以在凍干狀態(tài)下保藏 10年之久而不喪失活力 。 培養(yǎng)物的凍干過(guò)程 冷凍真空干燥操作流程 安培瓶 配制保護(hù)劑 滅菌 菌種 培養(yǎng) 制備菌懸液 分裝安培瓶 洗凈烘干 裝標(biāo)簽 加棉塞 預(yù)凍 真空干燥 測(cè)定水分 熔封管口 檢查真空度 包藏 (三 )凍干菌種的保藏與再生 1． 保藏：冷凍干燥后的培養(yǎng)物在低于 5℃ 下保藏 。 2． 復(fù)蘇： (1)在超凈工作臺(tái)中用 70％ 酒精棉球擦洗安瓿 ， 然后用砂輪在安瓿中銼一道溝 。 (3)在安瓿中加入 ～ 1ml營(yíng)養(yǎng)液體培養(yǎng)基 ， 慢慢旋轉(zhuǎn)安瓿 ， 使凍干菌種復(fù)水 。 (4)在指管中凍干
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