20xx年醫(yī)學(xué)專題—tunel染色檢測細(xì)胞凋亡-展示頁
2024-11-19 04:46本頁面
【正文】 〔1〕石蠟包埋的組織切片預(yù)處理：將組織切片置于染色缸中，用二甲苯洗兩次，每次5min。％甲基綠〔〕：；。TdT酶反響液：TdT酶32μl；TdT酶緩沖液 76μl，混勻，置于冰上備用。 含2%H2O2的PBS緩沖液〔〕：H2O2 ；PBS緩沖液 。(一)試劑配制磷酸緩沖液PBS〔〕：磷酸鈉鹽 50mM，NaCl 200mM。抗地高辛的特異性抗體與脊椎動物甾體激素的交叉反響不到1％，假設(shè)此抗體的Fc局部通過蛋白酶水解的方法除去后，那么可完全排除細(xì)胞Fc受體非特異性的吸附作用。毛地黃植物是地高辛的唯一來源。一、過氧化物酶標(biāo)記測定法原理：脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[〔digoxigenin〕11dUTP]在TdT酶的作用下，可以摻入到凋亡細(xì)胞雙鏈或單鏈DNA的3OH末端，與dATP形成異多聚體，并可與連接了報告酶〔過氧化物酶或堿性磷酸酶〕的抗地高辛抗體結(jié)合。低分子量的DNA別離后，也可使用DNA聚合酶進(jìn)行缺口翻譯〔nick translation〕，使低分子量的DNA標(biāo)記或染色，然后分析凋亡細(xì)胞。DNA雙鏈斷裂或只要一條鏈上出現(xiàn)缺口而產(chǎn)生的一系列DNA的3’OH末端可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶〔TdT〕的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸化酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3’末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測，這類方法一般稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法
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