20xx年醫(yī)學(xué)專題—tunel染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡-閱讀頁(yè)
2024-11-19 04:46本頁(yè)面
【正文】 ．。洗滌與終止反響緩沖液：氯化鈉 17. 4g；檸檬酸鈉 ；ddH2O 1000ml％二氨基聯(lián)苯〔DAB〕溶液：DAB 5mg；PBS 10ml，, 臨用前過濾后，%。100％丁醇，100％、95％、90％、80％和70％乙醇，二甲苯，10％中性甲醛溶液，乙酸，松香水等。用無水乙醇洗兩次，每次3min。用PBS洗5min 參加蛋白酶K溶液〔20ug／ml〕，于室溫水解15min，去除組織蛋白?！?〕冰凍組織切片預(yù)處理：將冰凍組織切片置10％中性甲醛中，于室溫固定10min后，去除多余液體。置乙醇：乙酸〔2：1〕的溶液中，于20℃處理5min，去除多余液體。〔3〕培養(yǎng)的或從組織別離的細(xì)胞的預(yù)處理：將約 5 107個(gè)/ml細(xì)胞于 4％中性甲醛室溫中固定 10min。用PBS洗兩次，每次5min，然后按下述步驟2進(jìn)行操作。用PBS洗兩次，每次5min。 用濾紙小心吸去切片周圍的多余液體，立即在切片上滴加 54μl TdT酶反響液，置濕盒中于37C反響 1hr〔注意：陰性染色對(duì)照，加不含TdT酶的反響液〕。 組織切片用PBS洗 3次，每次 5min后，直接在切片上滴加兩滴過氧化物酶標(biāo)記的抗地高辛抗體，于濕盒中室溫反響30min。％DAB溶液，室溫顯色3～6min。 于室溫用甲基綠進(jìn)行復(fù)染10min。依同樣方法再用100％正丁醇洗三次?！踩晨记绊氈欢ㄒO(shè)立陽(yáng)性和陰性細(xì)胞對(duì)照。陰性對(duì)照不加TdT酶，其余步驟與實(shí)驗(yàn)
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