20xx年醫(yī)學(xué)專題—tunel染色檢測細(xì)胞凋亡-全文預(yù)覽
【正文】 1次靜置30s。用PBS洗4次，每次5min。用濾紙小心吸去載玻片上組織周圍的多余液體，立即在切片上加2滴 TdT酶緩沖液，置室溫1～5min。在載玻片上滴加 50～100μl細(xì)胞懸液并使之枯燥。用PBS洗兩次，每次5min。用95％和75％乙醇各洗一次，每次3min。％甲基綠〔〕：；。 含2%H2O2的PBS緩沖液〔〕：H2O2 ；PBS緩沖液 ?？沟馗咝恋奶禺愋钥贵w與脊椎動(dòng)物甾體激素的交叉反響不到1％，假設(shè)此抗體的Fc局部通過蛋白酶水解的方法除去后，那么可完全排除細(xì)胞Fc受體非特異性的吸附作用。一、過氧化物酶標(biāo)記測定法原理：脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[〔digoxigenin〕11dUTP]在TdT酶的作用下，可以摻入到凋亡細(xì)胞雙鏈或單鏈DNA的3OH末端，與dATP形成異多聚體，并可與連接了報(bào)告酶〔過氧化物酶或堿性磷酸酶〕的抗地高辛抗體結(jié)合。DNA雙鏈斷裂或只要一條鏈上出現(xiàn)缺口而產(chǎn)生的一系列DNA的3’OH末端可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶〔TdT〕的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸化酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3’末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測，這類方法一般稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法〔TUNEL〕。TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)原理和方法細(xì)胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的分階段的過程，染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為5030
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