【正文】 選出僅含有純凈RCE細胞的培養(yǎng)孔, 收集純一的RCE細胞懸浮于含有硫酸軟骨素氧化降解物、牛眼生素、表皮細胞生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、家兔角膜基質(zhì)細胞培養(yǎng)液、羧甲基殼多糖、N乙酰葡萄糖鹽酸鹽和氨基葡萄糖鹽酸鹽的DMEM/F12 培養(yǎng)液(20%胎牛血清)中, 置CO2 細胞呈四角形或多角形, 3 , RCE 細胞生長狀態(tài)穩(wěn)定,現(xiàn)已被傳至67 代, 已經(jīng)建成了一個新的連續(xù)性RCE , h。內(nèi)皮細胞之間的復(fù)合連接結(jié)構(gòu)，又起到防止水分滲入角膜內(nèi)的屏障作用，從而保持角膜實質(zhì)層的相對脫水狀態(tài)。角膜內(nèi)皮細胞是通過其主動的代謝性液泵作用，把房水與角膜基質(zhì)隔開的生理屏障，其泵一漏系統(tǒng)可防止過多的水分和溶質(zhì)通過，使角膜基質(zhì)保持相對脫水的狀態(tài)，維持其透明性。角膜內(nèi)皮細胞的功能角膜內(nèi)皮細胞對角膜透明性有著至關(guān)重要的作用，角膜的高度透明是實現(xiàn)視覺器官正常生理功能的重要條件之一，而解剖形態(tài)完整和生理功能正常的角膜內(nèi)皮層則是保持角膜透明的關(guān)鍵。眼球手術(shù)、創(chuàng)傷、藥物毒性、炎癥、高眼壓和其它各種病理性刺激均可以使角膜內(nèi)皮細胞大量死亡。出生時內(nèi)皮細胞密度約3000/mm2，隨年齡的增大其密度逐漸下降，至階段細胞密度降為1400－2500/ mm2，同時，其細胞構(gòu)型亦失去規(guī)則的六角形布局。內(nèi)皮細胞的密度隨年齡增大而減低，同樣，因損傷、炎癥、眼部手術(shù)而引起的細胞丟失，通過增大細胞、減低細胞密度來代償完成的。4．后彈力層：后彈力層由內(nèi)皮產(chǎn)生，大約10微米厚，與Bowman層不同，Descemet 膜能輕易從基質(zhì)層脫離，損傷后可以再生。粘合物質(zhì)由角朊硫酸鹽、軟骨硫酸鹽組成，充盈纖維及細胞間隙。3．基質(zhì)層基質(zhì)層占角膜厚度的90%，主要由膠原纖維、粘合物質(zhì)和角化細胞組成。該層不能再生，損壞后會成為不透明的疤痕組織。角膜上皮細胞約每周更換一次,：a、疼痛 c、微生物性角膜潰瘍 d、復(fù)發(fā)性角膜糜爛 e、與自身免疫性疾病相關(guān)的角膜潰瘍 f、．前彈力層 :前彈力層位于上皮基底膜后面，厚約814微米。上皮細胞間以橋小體相接，構(gòu)成致密的質(zhì)膜，這層致密堅固的屏障可阻止大部分微生物的侵入，阻止淚液中液體和電解質(zhì)進入基質(zhì)層，使得角膜處于相對脫水狀態(tài)。新西蘭大白兔角膜內(nèi)皮細胞的建立即使內(nèi)皮層上的細胞。角膜是一凸形的高度透明物質(zhì)，直徑大約12毫米，垂直方向要略小于水平方向。第一篇：心得體會聽講座心得體會王丹生院長所作的關(guān)于新西蘭大白兔角膜內(nèi)皮細胞質(zhì)的建立的報告為失明的人帶來了重見光明的希望，假如這種技術(shù)取得成功，將會具有跨時代的意義。從中我也對生物技術(shù)專業(yè)的無限潛力有了更深的了解，而且，對于學(xué)好這門專業(yè)，我也有了更大的信心。角膜從結(jié)構(gòu)上共分為5層：上皮層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮層。1．上皮層: 角膜上皮厚約50微米，易與Bowman層相分離，由57層細胞組成，共有3種類型細胞：基底細胞、翼狀細胞、扁平細胞。電鏡觀察上皮細胞的外層細胞膜，可發(fā)現(xiàn)一些指狀突出物，稱為微絨毛，這些微絨毛伸入淚液膜，能吸附淚液，防止上皮細胞干燥。用光鏡觀察是一層相當(dāng)均勻的非細胞層，但通過電鏡觀察，該層是類似基質(zhì)的特殊層，并非真正的膜，而是表層基質(zhì)的致密層，由膠原纖維組成，不能與基質(zhì)層分離，只在靈長類可見。該層上有小孔，角膜神經(jīng)由此到達上皮?；|(zhì)的膠原纖維很規(guī)則、均勻，膠原纖維束構(gòu)成片狀，層層緊密相疊，基質(zhì)層的層狀結(jié)構(gòu)使角膜在剝離術(shù)中可以相當(dāng)容易地分離。腫脹的角膜，粘合物質(zhì)增加，膠原纖維大小無改變。5．內(nèi)皮層由一層六角形內(nèi)皮細胞所形成，厚約5微米，寬1820微米，直接與房水接觸，這層細胞的再生是受限制的，內(nèi)皮可用角膜內(nèi)皮顯微鏡觀察或拍攝。雖然部分細胞因年齡或疾病而增大，但是另一些細胞保持大小不變，這樣均勻的內(nèi)皮群落就會逐漸變得參差不齊。角膜內(nèi)皮細胞的屏障和主動液泵功能對于角膜保持正常厚度和透明性是極其重要的。一旦角膜內(nèi)皮細胞密度低于維持內(nèi)皮細胞生理功能的臨界密度（400－700/ mm2），角膜將出現(xiàn)不可逆的病理性改變。作為角膜最內(nèi)層的內(nèi)皮層是由單層內(nèi)皮細胞所組成，它前附著于后彈力層，后與前房水接觸，內(nèi)皮從角膜中央到周邊可被分為四個區(qū)：I區(qū)：占角膜中央8．6～91II111的大片區(qū)域；1I區(qū)：寬度僅150 ～500urn；m區(qū)：寬度50～150urn；1V區(qū)包括最周邊部分，與角膜的小梁網(wǎng)毗鄰，寬50～lOOum?。這一作用的實施，是通過角膜內(nèi)皮細胞的的Na 一K 一ATP酶的活性，維持角膜內(nèi)和房水內(nèi)的Na 梯度。任何導(dǎo)致角膜內(nèi)皮細胞損害的因素，均能使這一屏障功能受損，而導(dǎo)致角膜水腫，失去其透明性。第67 代培養(yǎng)細胞的特征性染色體數(shù)目為44 條, 、抗神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)抗體的免疫