【正文】 啶就產(chǎn)生了。強(qiáng)如TMG和NaH的，即使使用1當(dāng)量，也產(chǎn)生可觀的吲哚的N烷基化以及吡啶，吲哚羥基烷基化等反應(yīng)。我們在不同pKa值的多個(gè)基地進(jìn)行了篩選，從K2CO3到Cs2CO3，以及乙胺，tetramethylguanidine，1,8 二氮雜雙環(huán)[]螺7烯（DBU），氫化鈉。我們設(shè)想，OH類似物21可被甲基4 （溴甲基）苯甲酸烷基化，然后被其酸水解，從而產(chǎn)生一種在pH=。因此，我們做了一組在生理PH時(shí)增加極性的實(shí)驗(yàn)，用來探討改變過的吲哚5位基團(tuán)所帶來的影響。5OH的化合物21，由BBr3去甲基化的19（1B計(jì)劃）形成，與5 甲氧基化合物19（見表1）相比，其表現(xiàn)出在活性上的顯著降低與先前觀察到的5OH在化合物15的不利效果一致。此外，甲基吲哚氮的化合物13與NaH/CH3I在二甲基甲酰胺（DMF）（計(jì)劃1D）制造20時(shí)產(chǎn)生了一種化合物，它能誘發(fā)一些胞質(zhì)空泡化，但只有溫和影響細(xì)胞活力（見表1）。我們通過Vilsmeier哈克甲?；? 甲基5 甲氧基吲哚合成了關(guān)鍵中間體18，接著與4 乙酰吡啶耦合出化合物19（圖1C）。若其失去活性則證實(shí)吡啶氮（見表1）的必要性。相比之下，5 羥基取代化合物15在所有的檢測中表現(xiàn)出的生物活性卻大大降低。如表1所示，盡管他們在短期的增長/可行性實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞毒性不一致。 SD of quadruplicate (MTT) or triplicate (colony formation) determinations.接下來，我們分別用市售5 甲氧基和5 芐氧基吲哚3 –甲醛準(zhǔn)備化合物13和14來探索吲哚環(huán)的5位上基團(tuán)的官能團(tuán)作用。C, 90%。Scheme 1. Synthesis of Analogues of MIPP (Compound 2)aaThe specific substituents at R1, R2, R3, and Ar for each numbered pound are listed in the chart. For A–D, the specific conditions and reagents were as follows: (A) piperidine, CH3OH, reflux, 19–89%. (B) BBr3, CH2Cl2, ?78 176。元和正射類似物10和11，以及苯乙酮類似物9，均在誘導(dǎo)methuosis方面與MIPP相比相對無效。（3）48小時(shí)暴露在這些化合物中的細(xì)胞上顯示細(xì)胞集落形成方式（2周為限）。 （2）48小時(shí)時(shí)結(jié)束用3 （4,5 二甲基2 基）2,5 二苯基溴化四唑（MTT）法對細(xì)胞存活率評估，并在第一個(gè)24小時(shí)。（15）苯乙酮或各種乙酰吡啶，吲哚3 甲醛的縮合反應(yīng)產(chǎn)生化合物912（圖1A）。因此，一種類似物的初始構(gòu)成被合成，以用來研究調(diào)查吡啶氮的位置對生物活性的影響。18化合物（圖1）的檢驗(yàn)表明，吲哚和吡啶環(huán)之間的特有關(guān)系很可能在一些特定活動中起到重要作用。我們首先從比較MIPP和市售的幾個(gè)相關(guān)化合物（圖1化合物38）誘導(dǎo)methuosis的活性開始。（10）此外，MIPP在抑制對TMZ有高抗的GBM細(xì)胞的生長和活力方面也非常有效?；衔?被分配的縮寫是MIPP，即3 （2 甲基1H吲哚3 基）1 （4 吡啶基）2丙烯1。其中，化合物2（圖1）被選定做進(jìn)一步研究。我們發(fā)現(xiàn)，化合物1幾個(gè)小時(shí)內(nèi)在膠質(zhì)瘤細(xì)胞引起廣泛空泡，48小時(shí)內(nèi)造成細(xì)胞活力的重大損失。幾種查耳酮（12）已發(fā)現(xiàn)有顯著的抗癌活性，但尚未被報(bào)道能誘導(dǎo)細(xì)胞空泡化。查耳酮由一個(gè)1,3 二苯基2 丙烯1框架組成，這種框架是黃酮類天然產(chǎn)物的前體組成。然而，在本報(bào)告中包含的信息中，一種結(jié)構(gòu)獨(dú)特的誘導(dǎo)液泡的化合物我們的注意，因?yàn)樗嗨频囊活惙肿臃Q為查耳酮。結(jié)果SARs由于我們開始尋求可能引發(fā)methuosis的 druglike小分子，我們注意到Kirchhausen和同事（11）寫的一個(gè)報(bào)告，他們描述了被稱為vacuolin1的分子及一些其他三嗪類化合物，這些化合物能夠抑制Ca2+依賴溶酶體胞吐。最近，我們描述了一個(gè)原型查耳酮相關(guān)化合物，它能在抗TMZ和非抗GBM細(xì)胞以及來自乳腺癌，結(jié)腸癌，胰腺的其他癌癥細(xì)胞系以帶有methuosis的特征形式來誘導(dǎo)細(xì)胞死亡（10）。Methuosis本質(zhì)特點(diǎn)在于GBM細(xì)胞，它是被激活的Ras和Rac GTP酶異位表達(dá)而觸發(fā)這種形式的細(xì)胞死亡的場所。（6）這種死亡被認(rèn)為是非細(xì)胞凋亡形式，因?yàn)槠洳⒎前殡S著核染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞出泡，或核小體DNA片段。在methuosis（8，9），回收的減值和溶酶體導(dǎo)向販運(yùn)macropinocytotic囊泡的作用把他們鎖定在中間階段，在此他們?nèi)诤隙鸩叫纬奢^大的液泡。為此，我們定義了一個(gè)獨(dú)特的細(xì)胞死亡的形式稱為“methuosis”（6,7）methuosis的特點(diǎn)是大部分細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)空間以從macropinosomes派生空泡形式產(chǎn)生位移。（3，4）此外，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞通過提高他們修復(fù)DNA損傷的能力而獲得對烷化劑的抗藥性。（1）后者方法的一個(gè)限制是，他們以通過破壞DNA而引發(fā)內(nèi)在的凋亡途徑的形式工作。介紹盡管在發(fā)展中國家針對特有的某些類型的癌癥細(xì)胞的調(diào)控途徑的治療藥物有了最新進(jìn)展，許多腫瘤術(shù)后輔助治療的重要支柱仍然是輻射和DNA烷化劑。這些研究的潛在意義通過發(fā)現(xiàn)MOMIPP有效地降低了替莫唑胺耐藥性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和阿霉素耐藥乳腺癌細(xì)胞的生長活性而不斷被重視。在此，我們描述了直接相關(guān)化合物庫的合成及構(gòu)效關(guān)系，提供了深入了解兩個(gè)芳環(huán)系統(tǒng)的貢獻(xiàn)，并強(qiáng)調(diào)了一個(gè)強(qiáng)有力的衍生物，3 （5 甲氧基2 甲基1H吲哚3 基）1 （4 吡啶基）2丙烯1（即，MOMIPP）在微摩爾濃度這樣低的濃度下可誘導(dǎo)methuosis。對吲哚類查耳酮作為新型非細(xì)胞凋亡形式——Methuosis的誘導(dǎo)劑的合成和評價(jià)methuosis是一種新的蛋白酶獨(dú)立細(xì)胞死亡的形式，從胞吞胞吐派生的空泡的大量積累，最終導(dǎo)致細(xì)胞脫離底層和破裂。最近，我們描述了1查耳酮化合物，3 （2 甲基1H吲哚3 基）1 （4 吡啶基）2丙烯1（即，MIPP），它可以誘導(dǎo)methuosis在神經(jīng)母細(xì)胞瘤和其他類型的癌細(xì)胞發(fā)生。我們也分析了疊氮衍生物的生物活性，可能有助于旨在用光親和標(biāo)記技術(shù)鑒定蛋白質(zhì)目標(biāo)MOMIPP的未來研究。因此，它可能可以作為一種能夠在癌癥中通過methuosis形式來促進(jìn)細(xì)胞凋零的藥物原型，這種原理與傳統(tǒng)細(xì)胞死亡（如細(xì)胞凋亡）的機(jī)理不同。一個(gè)例子是高度惡性腦腫瘤，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM），在現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的護(hù)理是手術(shù)，在可能的情況下，也會有輻射和口服替莫唑胺（TMZ網(wǎng)站）的輔助治療。（2）由于GBM細(xì)胞通常在海港抑癌基因的突變（例如，PTEN，P53，PRB），他們是相對不敏感的凋亡刺激。（5）我們相信，有可能開發(fā)新的方法通過誘導(dǎo)可替代的非細(xì)胞凋亡的細(xì)胞死亡形式來治療這類有抗藥性的癌癥，這種細(xì)胞死亡形式不以DNA損傷作為觸發(fā)。（6）后者當(dāng)膜皺褶（偽足）附上許多口袋狀細(xì)胞外液，并內(nèi)化時(shí)形成。這最終導(dǎo)致代謝活動減少，細(xì)胞膜破裂。methuosis也是caspase獨(dú)立的，因?yàn)樗荒鼙粡V譜蛋白酶抑制劑如ZVADFMK阻止。然而，利用這種非常規(guī)的細(xì)胞死亡途徑殺死那些不易細(xì)胞凋亡的癌細(xì)胞的潛力取決于分子是否可以誘導(dǎo)methuosis druglike屬性識別。在此，我們報(bào)告了相關(guān)化合物庫合成及構(gòu)效關(guān)系（SAR）的研究從而導(dǎo)出（1）定義的主要特點(diǎn)，為誘導(dǎo)methuosis活動，（2）確定改進(jìn)生物活性的衍生物以及發(fā)展一個(gè)可能適合在未來目標(biāo)識別工作中用作光親探測器的疊狀類似物做準(zhǔn)備。雖然這些化合物能誘導(dǎo)標(biāo)記的細(xì)胞空泡化，他們并沒有引起細(xì)胞死亡。這種化合物的結(jié)構(gòu)被描繪在圖1（化合物1）。然而，查耳酮已長期被廣泛應(yīng)用于描述許多在此框架內(nèi)建立的合成衍生物。（1214 ）這促使我們懷疑化合物1可能代表了一種新型的查耳酮，它可以通過誘導(dǎo)methuosis殺死癌細(xì)胞。（10）化學(xué)數(shù)據(jù)庫的檢索發(fā)現(xiàn)了相似性 75％的其他化合物。它引起的空泡比化合物1引起的更大、更多。 MIPP的生物效應(yīng)的詳細(xì)評價(jià)表明，這種化合物誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的形式與methuosis的數(shù)據(jù)圖表相匹配。（ 10）Figure 1. Structures of pounds 1 and 2, initially found to be active inducers of methuosis(10) as pared with mercially avai