基因工程-克隆載體09-展示頁(yè)
2025-02-14 10:54本頁(yè)面
【正文】 (Replicon)： Genome能獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制的單位，每個(gè)復(fù)制子都含有一個(gè) 復(fù)制起點(diǎn) 拷貝數(shù) 嚴(yán)緊型（ stringent plasmid） :低拷貝 松弛型（ ralaxed plasmid）：高拷貝質(zhì)粒 復(fù)制子 拷貝數(shù)pBR322 及其衍生質(zhì)粒 pMB1 15～ 20pUC 系列質(zhì)粒及其衍生質(zhì)粒 突變的 pMB1 500～ 700pACYC 及其衍生質(zhì)粒 p15A 10～ 212pSC101 及其衍生質(zhì)粒 pSC101 ～ 5 ColE1 ColE1 15～ 203．質(zhì)粒的不相容性 （ plasmid inpatibility）編碼非染色體控制的遺傳性狀特 性復(fù)制也叫粘粒載體。因此，載體本身必須是一個(gè)復(fù)制單位即復(fù)制子（ replicon），具有 復(fù)制起始點(diǎn) ，而且插入外源基因后不會(huì)影響載體自身的復(fù)制能力?；蚬こ梯d體與受體細(xì)胞 Vector and host cell載體的概念載體應(yīng)具有的特性載體的類(lèi)型目錄 目的外源基因分離后，是 無(wú)法自主進(jìn)入到宿主細(xì)胞并進(jìn)行復(fù)制表達(dá)的，必須有一個(gè)運(yùn)載工具將其運(yùn)達(dá)宿主細(xì)胞，才能達(dá)到復(fù)制、擴(kuò)增和表達(dá)的目的載體的概念 將外源目的基因 帶入 宿主細(xì)胞并能與其一起復(fù)制、表達(dá)的 基因運(yùn)載工具 就叫做基因載體或基因工程載體 基因操作的核心工具載體應(yīng)具有的特性 在受體細(xì)胞中可以 獨(dú)立地進(jìn)行自我復(fù)制 。 能夠帶動(dòng)一定長(zhǎng)度的外源基因 一起復(fù)制 易于引入宿主細(xì)胞 在宿主細(xì)胞中 具有盡可能多的拷貝數(shù) ，以利外源基因擴(kuò)增 在質(zhì)粒非必需區(qū)有供外源基因插入的 多克隆位點(diǎn) （ multiple cloning sites, MCS） 具有一定的容納外源基因的幅度，即 容量 具有合適的 選擇標(biāo)記 載體的 分子量要小 ：降低對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響；利于容納較大的外源基因；拷貝高；易于分離；減少了不必要酶切位點(diǎn) 在細(xì)胞中 穩(wěn)定性高 易于從宿主細(xì)胞中分離、純化和鑒定 質(zhì)粒本身必須是 安全的 最好具有 廣泛的宿主適應(yīng)性、核酸序列背景清楚 按其來(lái)源和本質(zhì)可分為以下 7種： 質(zhì)粒載體 (plasmid) 噬菌體載體 COS質(zhì)粒 （ cosmid）。是質(zhì)粒與 λ 的組合 噬菌粒載體 （ phagemid）是質(zhì)粒與 f1的組合 病毒載體 DNA病毒為主 人工染色體載體 穿梭載體 （ shuttle）載體的類(lèi)型 按功能區(qū)分： ? 克隆載體：也叫轉(zhuǎn)移載體，只起轉(zhuǎn)運(yùn)，擴(kuò)增作用 ? 表達(dá)載體：帶有表達(dá)功能，即有啟動(dòng)子，可轉(zhuǎn)錄和 /或翻譯? 測(cè)序載體：只產(chǎn)生 單鏈 DNA用于測(cè)序，如 M1 T載體、 U載體? 轉(zhuǎn)錄及調(diào)控載體 按照所需宿主細(xì)胞的類(lèi)型分： 真核（表達(dá)）載體 原核（表達(dá)）載體 穿梭載體質(zhì)粒載體Plasmid 質(zhì) 粒 定義：獨(dú)立于染色體的 自主復(fù)制 的 DNA物質(zhì)。不相容的質(zhì)粒一般都 利用同一復(fù)制系統(tǒng)生物學(xué)特性（分子標(biāo)記） 質(zhì)?？梢再x于宿主細(xì)胞不同的 表型 ，如 抗藥性 、結(jié)合轉(zhuǎn)移特性、產(chǎn)腸毒素或溶血素等 質(zhì)粒表型的表示法： F+/F、 Ampr/Amps、Tetr/Tets、 Ampr/Tets、 Kanr、 Strr、 Cmlr、Neor 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移和丟失（清除） 帶有一個(gè) tra基因 ，可以自主地在宿主細(xì)胞間通過(guò)控制細(xì)菌配對(duì)和結(jié)合而發(fā)生轉(zhuǎn)移的質(zhì)粒叫 接合型（ conjugative）質(zhì)粒，又叫自我轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒。基因工程中質(zhì)粒，特別是重組質(zhì)粒的丟失是非常不幸的事 可促使質(zhì)粒丟失的因素： 吖啶橙、結(jié)晶紫、溴化乙錠、利福平、 SDS、紫外線(xiàn) 等質(zhì)粒載體的概念 質(zhì)粒載體是以細(xì)菌天然質(zhì)粒的各種組件為基礎(chǔ)，經(jīng) 人工改造、構(gòu)建 而成的特殊質(zhì)粒 外源基因的載體，是基因工程的工具質(zhì)粒的基本條件復(fù)制起點(diǎn)：自我增殖，一個(gè)或兩個(gè)（shuttle ） 標(biāo)記基因選擇 標(biāo)記基因：用于鑒別目標(biāo) DNA （載體）的存在，將成功轉(zhuǎn)化了載體的宿主挑選出來(lái) 篩選 標(biāo)記基因：用于將特殊表型的重組子挑選出來(lái)標(biāo)記基因選擇標(biāo)記 1. α 互補(bǔ) （ αplementation ） α 互補(bǔ)是指 lacZ 基因上缺失 近操縱基
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