動物細胞工程—單克隆抗體制備復(fù)習(xí)策略-展示頁
2024-09-26 20:36本頁面
【正文】 小資料： 在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途徑阻斷，僅有 D 合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖， 但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞因為可以利用淋巴細胞中的 S 途徑合成DNA而增殖。 ② 人淋巴細胞中有這兩種 DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。 ⑵ 如何誘導(dǎo)融合？ 加入聚乙二醇 （ PEG） ⑴ 如何得到 B淋巴細胞？ 單克隆抗體的 過程 ⑶ 細胞兩兩融合后，有哪些類型？ BB B瘤 (雜交瘤細胞 ) 瘤 瘤 ⑷ 如何篩選出雜交瘤細胞？ 單克隆抗體制備過程中，總共有兩次篩選，第一次篩選出雜交瘤細胞，第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，兩次篩選的原理和方法是不相同的。 如果利用單個 B淋巴細胞進行無性繁殖（克隆），形成細胞群，這樣的細胞群就有可能產(chǎn)生出 化學(xué)性質(zhì)單一 、 特異性強 的抗體 —— 單克隆抗體 。 特點： 產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應(yīng)不夠靈敏。 抗體分布于血清中，也分布于組織液及外分泌液中。 各種抗原的決定簇數(shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種。有時自身的組織或細胞也會成為抗原，如癌細胞等。 融合后的雜交細胞經(jīng)過有絲分裂后仍能形成兩個完整的雜交細胞 ： ⑴突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能； ⑵為制造 單克隆抗體 開辟了新途徑 使用相應(yīng)的抗體檢測乙肝病毒 —— 抗原 醫(yī)院一般怎樣檢測人體內(nèi)是否存在乙肝病毒？ 乙肝病毒模式圖 凡能夠引起機體產(chǎn)生特異性 免疫應(yīng)答的物質(zhì)叫做抗原 。 ②滅活病毒誘導(dǎo)細胞融合的原理 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。 ⑴自然發(fā)生： 受精卵 ⑵人工誘導(dǎo)： 利用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)動物細胞融合 誘導(dǎo)因素：聚乙二醇、 滅活的病毒 或電激等。 條件 ？ 液體、營養(yǎng)物質(zhì)（ 血清 ）、 PH、溫度、氣體、無菌等 動物組織塊 細胞懸液 原代培養(yǎng) 傳代培養(yǎng) 胰蛋白酶處理分散成單個細胞 幼齡動物的器官組織；動物胚胎 細胞貼壁 接觸抑制 原代培養(yǎng) 傳代培養(yǎng) 加入培養(yǎng)液 用胰蛋白酶等處理貼壁細胞 適宜條件 不死性細胞 電激處理使供體核進入受體卵母細胞構(gòu)建重組胚胎 卵母細胞采集、培養(yǎng) MⅡ 期 卵母細胞 供體牛 供體細胞注入去核卵母細胞 代孕母牛 克隆牛 體細胞培養(yǎng) 去核卵母細胞 去核 胚胎 移植 體細胞核移植過程 （體細胞克隆動物） 體細胞核移植技術(shù)存在的問題 （ 1）成功率非常低 （ 2）克隆動物以表現(xiàn)早衰、生理缺陷等健康問題 1970年，有兩位科學(xué)家 做了一個著名的實驗： 人 — 鼠細胞融合的實驗， 以證明細胞膜上的蛋白 質(zhì)分子是運動的。 動物血清 ？ 體溫和 PH都應(yīng)與 動物體內(nèi)環(huán)境 相似。？ ，對取材有何要求？ 實驗材料，藥性、毒性檢測，提取細胞分泌物等 選擇胚胎細胞或幼年動物組織，因為其 分裂增殖能力強 。 ？培養(yǎng)基中的成分有何特點？ 培養(yǎng)基是液體的，成份與 動物內(nèi)環(huán)境 相似。 動物細胞培養(yǎng) 就是從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成 單個細胞 ，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。 人 — 鼠細胞是怎樣實現(xiàn)融合的？動物細胞融合有什么實踐意義呢？ 三、 動物細胞融合與單克隆抗體 ： 是指兩個或兩個以上的細胞融合為一個細胞的過程。 仙臺病毒 紫外線 滅活 喪失感染活性（不感染細胞）
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