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動物細胞工程—單克隆抗體制備復習策略-文庫吧資料

2024-09-24 20:36本頁面
  

【正文】 不同孔內(如圖所示)培養(yǎng)。 圖 10 ( 1)動物細胞融合( 2)分泌特異性抗體 、無限增殖( 3) PEG(滅活的病毒、電刺激) ( 4)細胞融合是隨機的過程,在 HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng),要篩選出 細胞。 ( 2)圖 10中細胞 A體外培養(yǎng)不具有 分裂能力,但能分泌 , 細胞 B體外培養(yǎng)能夠 。 單克隆抗體 篩 選 雜交細胞 雜交瘤細胞 體外或體內 細胞培養(yǎng) 篩選 骨髓瘤 細胞 誘導細胞融合 特異性雜交瘤細胞 雜交瘤細胞系 提取 經過免疫的 B淋巴細胞 動物細胞融合技術 動物細胞培養(yǎng)技術 單克隆抗體的制備過程: 特點:既能產生專一抗體又能大量繁殖 特點:特異性強靈敏度高可大量制備 注射抗原 免疫 1975年 Kohler和 Milstein的單克隆抗體技術在生產和使用抗體方面開創(chuàng)了新紀元,圖 10示單克隆抗體制備流程階段示意圖。 小鼠的脾臟 PEG、滅活的病毒等 利用 HAT選擇培養(yǎng)基培養(yǎng),篩選 否 用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng),稀釋度要 保證每個孔內不多于一個細胞。 ⑵用于治療疾病和運載藥物 ①特異性強、靈敏度高 生物導彈 —— 單克隆抗體+抗癌藥物 ②療效高、毒副作用小 結合同位素的單抗 生物導彈 結合同位素的單抗 生物導彈 單抗 放射性同位素 項目 動物細胞融合 植物體細胞雜交 原理 細胞膜的流動性 細胞膜的流動性和植物細胞的全能性 融合前提 分散成單個細胞 去除細胞壁 誘導方法 聚乙二醇、離心、振動、電激、 滅活病毒 聚乙二醇、離心、振動、電激、 結果 獲得雜種細胞或細胞產物 獲得雜種植株 用途 制備單克隆抗體 培育作物新品種 意義 使遠緣雜交成為可能 克服遠緣雜交障礙 動物細胞工程小結 ? 動物細胞培養(yǎng): 原理、營養(yǎng)、條件、過程、細胞生長特點、結果、應用 ? 動物細胞融合: 原理、誘導方法、過程、應用 ? 單克隆抗體的制備: 原理、過程、特點、應用 ? 核移植與克隆動物: 供體、受體、核移植方法、克隆動物的方法、克隆動物的遺傳特性、應用 ? 動、植物細胞工程的比較: 植物組培技術與動物細胞培養(yǎng)技術、植物體細胞雜交技術與動物細胞融合技術 ⑶ 圖中 B為 ________過程, 常用 _________作為誘導劑 ,該細胞繼承 ___________的遺傳特性,既能__________,又能 ___________ 。 ③ 用于治療疾病和運載藥物 利用同位素標記單抗,在特定組織成像 制成 生物導彈 ,將藥物定向帶到癌細胞所在的位置,在原位殺死癌細胞,療效高、副作用小。怎么篩 ? 又是一個思路問題。 ⑻ 如何得到大量的單克隆抗體? 體內培養(yǎng) 體外培養(yǎng) 單克隆抗體 —— 化學性質單一、特異性強 ?抗體 ?抗原 ?應答 ?抗體的不純性 動物細胞受到抗原刺激 ,引起免疫反應產生的球蛋白 . 不是自己的而又能引起免疫應答反應的物質就是抗原 . 一種抗原有多種不同的決定簇 ,刺激的是多種 B細胞 ,作用于不同的 B細胞后 ,會產生多種抗體 , 這是多克隆的 , 故不純 ! 抗原 B細胞 漿細胞 抗體 刺激 ?怎么才能得到純的抗體 ? ?光純還不行 ,還要大量 .怎么辦 ? ?但,有 問題 : ?找,什么細胞能無限繁殖呢 ? ?思路就出來了 : 要想獲單一的純抗體 ,就必須從一個 B細胞出發(fā) . 讓 B細胞大量繁殖 (克隆 )就可以產生大量抗體了 . B細胞是不能無限繁殖的 .怎么辦 ? 癌 ! 只有癌細胞 . 但它不能產生抗體 . 癌細胞能無限繁殖 ,但不能產生抗體 .B細胞能產生抗體 ,但不能大量繁殖 .融合呀 !只要將兩個細胞融合即可互補 . 雜交瘤細胞 HAT篩選 ? McAb 大量培養(yǎng) PEG誘導細胞融合 免 疫 B 脾 礦物油 骨髓瘤 瘤 問題 : 在培養(yǎng)體系中 , 有 4種細胞 . B細胞、瘤細胞 ,和雜交細胞。最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養(yǎng)。 你想到篩選雜交瘤細胞的方案了么?
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