過氧化物酶(pod)同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳-展示頁
2024-09-02 17:05本頁面
【正文】 分析蛋白質(zhì)、酶、核酸等生物大分子，有較高的分辨率，目前已成為生物科學(xué)研究中必不可少的手段之一。了解過氧化物酶同工酶電泳過程。過氧化物酶(POD)同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳一、目的了解聚丙烯酰胺凝膠電泳原理。了解聚丙烯酰胺凝膠的制作過程。二、實驗原理：聚丙烯酰胺凝膠電泳原理及影響電泳的主要因素帶電粒子在電場中向與其自身帶相反電荷的電極移動，這種現(xiàn)象稱為電泳。帶電離子在電場中的泳動速度（1）和遷移率（泳動度）（2）V=Ea(1)6πrηu=q因此，電泳應(yīng)盡可能在恒溫條件下進(jìn)行。同時，所選用的pH以能擴大各種被分離物質(zhì)所帶電荷量的差異為好，以利于分離各種成分。另外，遷移率還受電滲現(xiàn)象的影響。例如在紙電泳中，由于濾紙（纖維素）上帶有負(fù)電荷，因感應(yīng)相吸而使與濾紙相接觸的水溶液帶正電荷，從而使液體向負(fù)極移動，帶動著本來是向負(fù)極泳動的物質(zhì)以更快的速度移動。聚丙烯酰胺凝膠結(jié)構(gòu)中不帶電荷，在電場中電滲現(xiàn)象極為微小。最后，要考慮選用離子強度適宜的溶液。同時可使被分離的帶電離子對電流貢獻(xiàn)最大從而加快電泳速度。～。（1）式中泳動速度V除了上述影響因素外，還與電場強度E成正比。這種凝膠是以丙烯酰胺單體（Acrylamide，簡寫為Acr）和交聯(lián)劑N，N39。Methylena Bisacrylamide，簡寫為Bis）在催化劑的作用下聚合而成的。但在具有自由基團(tuán)體系時，它們聚合?；瘜W(xué)聚合的引發(fā)劑是過硫酸銨 (NH4)2S2O3（Ammonium persulfate，簡寫為Ap），催化劑是N，N，N39。四甲基乙二胺（Tetramethylenediamine，簡寫為TEMED）。冷卻可使聚合速度變慢；一些金屬抑制聚合；分子氧阻止鏈的延長，防礙聚合作用。光聚合以光敏感物核黃素（即VB2）作為催化劑，在痕量氧存在下，核黃素經(jīng)光解形成無色基，無色基被氧再氧化成自由基，從而引起聚合作用。鏈的縱橫交錯，形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使凝膠具有分子篩性質(zhì)。此外，長鏈上富含酰胺基團(tuán)，使其成為穩(wěn)定的親水凝膠。每100mL凝膠溶液中含有的單體（Acr）和交聯(lián)劑（Bis）總克數(shù)稱為凝膠濃度，用T％表示。改變凝膠濃度以便適應(yīng)各種樣品的分離。但根據(jù)蛋白質(zhì)與核酸分子量不同，適用的濃度也不同（見表1）。 質(zhì)分 子 量 范 圍適用的凝膠濃度(%)蛋 白 質(zhì) 20～30 15～20 10～15 ＞5105 2～5核 ＜104 104～105 5～10上層為大孔徑的濃縮膠，下層為小孔徑的分離膠。凝膠濃度較小，孔徑相對較大。分離膠:又稱電泳膠，通?？讖捷^小，通過選擇合適的凝膠濃度，使樣品組分得以很好地分離。（2）緩沖液離子組成及各層凝膠的pH不同。（3）在電場中形成不連續(xù)的電位梯度。在這三種
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1