植病研究法---細(xì)菌病害的研究法-展示頁(yè)
2024-08-30 22:22本頁(yè)面
【正文】 甘油 10ml 蔗糖 10g 酪朊水解物 1g 氯化銨 (NH4c1) 5g 磷酸氫二鈉 (Na2HPO4) 硫酸十二烷基鈉 瓊膠 15g 蒸餾水 1000ml | pH值 由于培養(yǎng)基中含有十二烷基硫酸鈉，已經(jīng)有一定的選擇性。以上培養(yǎng)基，已有選擇性培養(yǎng)基的作用，以 甘露糖醇作為碳源是它的特點(diǎn)。 土壤桿菌屬細(xì)菌的菌落圓形、凸起、發(fā)亮，最初淺藍(lán)色，以后深綠色 。4Hz0 320mg 磷酸氫二鉀 (K2HPO4) 2g 氯化鋰 (LiCl) 6g 硫酸鎂 (MgSO4因此，在滅菌后和使用前，最好是再核對(duì)一下培養(yǎng)基的酸度。 ? 因此，分離時(shí)要選用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，有時(shí)要用選擇性培養(yǎng)基。一般來(lái)說(shuō)，寄生性細(xì)菌對(duì)培養(yǎng)基的要求要比腐生性細(xì)菌嚴(yán)格。 ? 標(biāo)本保存的時(shí)間較長(zhǎng)而不容易直接分離成功，可以經(jīng)過(guò) 接種后再分離 .例如，分離軟腐病細(xì)菌時(shí)，由于腐爛組織中往往雜有大量的腐生菌，可以挑取少許腐爛組織針刺接種在相應(yīng)的健全組織上，發(fā)病以后再?gòu)慕臃N的組織上分離。存放太久的標(biāo)本，其中病原細(xì)菌的生活力減弱，而腐生性細(xì)菌則滋長(zhǎng)很快，從這種組織分離到的大都是腐生菌。為了加快消除冷凝水，可以將培養(yǎng)皿在 37℃ 的溫箱中放一二天，或者在無(wú)菌的條件下，將培養(yǎng)皿的蓋打開(kāi)，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿斜靠在蓋上，在 50℃ 的干燥箱中干燥 30min。 目的都是使細(xì)菌分開(kāi)形成分散的菌落。 先在平板的一側(cè)順序劃 3～ 5條線，再將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn) 60176。 ? 取小塊病組織，經(jīng)過(guò)表面消毒和滅菌水洗過(guò) 2次以后，放在滅菌載玻片上的滅菌水中，用滅菌玻棒研碎。如水稻白葉枯病細(xì)菌，用蛋白胨水或粘土懸浮液稀釋的，培養(yǎng)后形成菌落的數(shù)目比用清水稀釋的多。一般植物病原細(xì)菌，用滅菌水稀釋是適宜的。培養(yǎng)皿用記號(hào)筆注明分離材料、日期和稀釋編號(hào)。然后，將溶化的瓊膠培養(yǎng)基冷卻到 45℃ 左右，倒在三個(gè)培養(yǎng)皿中。 ? 取滅菌的培養(yǎng)皿 3個(gè)，每個(gè)培養(yǎng)皿中加滅菌水 ，切取約 4mm見(jiàn)方的小塊病組織，經(jīng)過(guò)表面消毒和滅菌水洗過(guò) 3次以后，移在第一個(gè)培養(yǎng)皿的水滴中。組織分離法對(duì)病原細(xì)菌是不適用的，原因是它不能使病原細(xì)菌與雜菌分開(kāi)，雜菌生長(zhǎng)快，會(huì)抑制病原細(xì)菌的生長(zhǎng)。 第二節(jié) 病原細(xì)菌的分離培養(yǎng) ? 植物病原細(xì)菌一般都是用稀釋分離法。 ? 病部有時(shí)有菌膿排出。這樣的區(qū)分雖然不是絕對(duì)的，但是指出它們之間的關(guān)系，在診斷上是很有意義的。第三部分 植物細(xì)菌病害研究技術(shù) ? 第一節(jié) 植物病原細(xì)菌的鑒定 ? 第二節(jié) 病原細(xì)菌的分離培養(yǎng) ? 第三節(jié) 病原細(xì)菌培養(yǎng)性狀觀察 ? 第四節(jié) 致病性測(cè)定 ? 第五節(jié) 細(xì)菌的形態(tài)觀察 第一節(jié) 植物病原細(xì)菌的鑒定 ? 1．細(xì)菌病害標(biāo)本的檢查 ? (1)癥狀的觀察 植物細(xì)菌病害表現(xiàn)各種類型的癥狀，不同屬的細(xì)菌侵染植物后引起的癥狀有所不同。 棒形桿菌屬細(xì)菌主要引起萎蔫， 假單胞菌屬細(xì)菌主要引起葉斑和葉枯（少數(shù)枝枯、蔫萎和軟腐）， 黃單胞菌屬細(xì)菌主要引起葉斑和葉枯，土壤桿菌屬細(xì)菌主要引起瘤腫（少數(shù)其他畸形）， 歐文氏菌屬細(xì)菌主要引起軟腐（少數(shù)蔫萎和枝枯）。 許多細(xì)菌性病害的病斑帶有水漬狀，有時(shí)可以作為診斷的特征，但并不是所有細(xì)菌病害都是這樣。菌膿灰白色到黃色，珠狀或其他形狀，干燥后在表面形成菌膜。病原細(xì)菌在組織中的數(shù)量很大，稀釋培養(yǎng)可以使病原細(xì)菌與雜菌分開(kāi)，形成分散的菌落，容易分離得到純培養(yǎng)。稀釋分離有以下兩種方法。用滅菌的玻棒 將病組織研碎，靜置 10～ 15min，使組織中的細(xì)菌流入水中 (配成懸浮液 )，然后用滅菌的移植環(huán)從第一個(gè)培養(yǎng)皿中移植 3環(huán)到第二個(gè)培養(yǎng)皿中，充分混合后再移植3環(huán)到第三個(gè)培養(yǎng)皿中。冷卻凝固后， 將培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)，在適溫下培養(yǎng) 。 ? 細(xì)菌懸浮液的配法有時(shí)影響分離的效果。有時(shí)改用滅菌的生理食鹽水 (%的 NaCl)或肉汁凍培養(yǎng)液稀釋比較好。粘土的作用大致是細(xì)菌團(tuán)聚在土粒上，更容易形成菌落 。靜置一定時(shí)間，用滅菌的移植環(huán)蘸取以上組織液在瓊膠平板上劃線培養(yǎng) 。 將移植環(huán)滅菌后 ,從第二條線末端，順序劃出 35條線。 ? 劃線分離法的關(guān)鍵是要等到瓊膠平板表面的 冷凝水完全消失后才能劃線，否則細(xì)菌將在冷凝水中流動(dòng)而影響形成單個(gè)分散的菌落 。 植物病原細(xì)菌的分離還需注意： [1]分離材料新鮮 ? 要 從新鮮的標(biāo)本和新的病斑分離 。 ? 分離用的標(biāo)本最好是 夾在吸水紙中郵寄 ，放在塑料袋中保濕是不適宜的。 [2]適宜的培養(yǎng)基 ? 分離失敗的原因，有時(shí)是由于培養(yǎng)基不適宜。同時(shí)，一種 適宜于純培養(yǎng)的培養(yǎng)基 (細(xì)菌群集沒(méi)有其他雜菌干擾 )， 不一定適宜于分離 (細(xì)菌分散而單獨(dú)存在，同時(shí)還可能有雜菌干擾 )。但有時(shí)失敗的原因不是培養(yǎng)基的成分不適宜，而是由于 培養(yǎng)基的酸度不適當(dāng)或存放的時(shí)間太長(zhǎng)。 二、分離培養(yǎng)基 （ 1）通用培養(yǎng)基 : NA培養(yǎng)基 （ 2）屬和種的選擇性培養(yǎng)基 ? [1]土壤桿菌屬 (Agrobacterium) 一般是用甘露糖醇培養(yǎng)基 甘露糖醇 15g 硝酸鈉 (NaNO3) 5g 硝酸鈣 [Ca(NO3)z7H20) 溴百里酚藍(lán) 瓊膠 15g 蒸餾水 1000ml 滅菌后酸度是 ，培養(yǎng)基呈深藍(lán)色。溴百里酚藍(lán)抑制革蘭氏反應(yīng)陽(yáng)性
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1