基因工程技術(shù)與應(yīng)用知識點-展示頁
2024-08-20 04:40本頁面
【正文】 內(nèi)切酶的識別序列，酶切后可產(chǎn)生一定的粘性末端，便于與具有相同粘性末端的另一DNA片段連接。引起星活性原因：若使用buffer不當(dāng), 會有star activity，而star activity是指限制酶對所作用的DNA及序列失去專一性, 當(dāng)酶辨認(rèn)切割位置的能力降低，導(dǎo)致相似的序列或是錯誤的辨認(rèn)序列長度也會作用，而產(chǎn)生錯誤的結(jié)果。在合適的溫度和緩沖液中，在50μl反應(yīng)體系中，1小時內(nèi)完全切割1微克DNA所需的酶量為1個酶活性單位U。同尾酶：來源不同、識別序列不同，但產(chǎn)生相同粘性末端的酶粘性末端：DNA末端一條鏈突出的幾個核苷酸能與另一個具有突出單鏈的DNA末端通過互補配對粘合，這樣的DNA末端，稱之。Hsd S－識別特定DNA序列，Hsd M－甲基化，Hsd R－限制性內(nèi)切酶功能。是一類能識別雙鏈DNA中特殊核苷酸序列，并使每條鏈的一個磷酸二酯鍵斷開的內(nèi)脫氧核糖核酸酶。指由同個祖先經(jīng)過無性繁殖方式得到的一群由遺傳上同一的DNA分子、細(xì)胞或個體組成的特殊生命群體。包括細(xì)胞工程和基因工程等不同的技術(shù)層次。b) DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)和半保留復(fù)制機(jī)理?；蚬こ痰亩x：按照預(yù)先設(shè)計好的藍(lán)圖，利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，特別是酶學(xué)技術(shù)，對遺傳物質(zhì)DNA直接進(jìn)行體外重組操作與改造，將一種生物（供體）的基因轉(zhuǎn)移到另外一種生物（受體）中去，從而實現(xiàn)受體生物的定向改造與改良?；蚬こ痰幕具^程：切、接、轉(zhuǎn)、增、檢基因工程理論依據(jù)：a) 生物的遺傳物質(zhì)是DNA。c) 遺傳信息的傳遞方式（中心法則）和三聯(lián)體密碼子系統(tǒng)的建立遺傳工程：指以改變生物有機(jī)體性狀為目標(biāo)，采用類似工程技術(shù)手段而進(jìn)行的對遺傳物質(zhì)的操作，以改良品質(zhì)或創(chuàng)造新品種?？寺?。限制性核酸內(nèi)切酶。限制性內(nèi)切酶由三個基因位點所控制：hsd R限制性內(nèi)切酶， hsd M限制性甲基化酶， hsd S控制兩個系統(tǒng)的表達(dá)。命名法：例如Haemophilus influenzue）d 株中分離的第三個酶： Hind III 同裂酶:不同來源的限制酶具有相同的識別位點和切割位點。酶活性單位。星活性：指限制性內(nèi)切酶在非標(biāo)準(zhǔn)條件下，對與識別序列相似的其它序列也進(jìn)行切割反應(yīng)，導(dǎo)致出現(xiàn)非特異性的DNA片段的現(xiàn)象。連桿：化學(xué)合成的8～12個核苷酸組成的寡核苷酸片段。底物位點優(yōu)勢效應(yīng): 酶對同一個DNA底物上的不同酶切位點的切割速率不同銜接頭：化學(xué)合成的寡核苷酸，含有一種以上的限制性核酸內(nèi)切酶識別序列。逆轉(zhuǎn)錄酶：以mRNA為模板合成其互補DNA。末端轉(zhuǎn)移酶：不依賴于DNA的DNA聚合酶，來自于小牛胸腺組織，在DNA分子的3162。多核苷酸激酶：對核酸末端羥基進(jìn)行磷酸化的酶。；DNA片段末端同聚物加尾后進(jìn)行連接載體：指能夠運載外源DNA片段（目的基因
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