【正文】 溶液用氨液堿化，并立即用乙醚萃取，所得的乙醚溶液，放置后即可析出蝙蝠葛堿的乙醚加成物結(jié)晶。一般經(jīng)過精制的化合物，在蒸去溶劑抽松為無定形粉未時(shí)就是如此，有時(shí)只要加入少量溶劑，往往立即可以溶解，稍稍放置即能析出結(jié)晶。 一般是應(yīng)用適量的溶劑在加溫的情況下，將化合物溶解再放置冷處。又如蝙蝠葛堿通常為無定形粉未，但能和氯仿或乙醚形成為加成物結(jié)晶。但有些化合物在一般溶劑中不易形成結(jié)晶，而在某些溶劑中則易于形成結(jié)晶。溶劑的沸點(diǎn)亦不宜太高。 　　2．溶劑的選擇；制備結(jié)晶，要注意選擇合宜的溶劑和應(yīng)用適量的溶劑。例如游離生物堿可制備各種生物堿鹽類，羥基化合物可轉(zhuǎn)變成乙酸化物，碳基化臺(tái)物可制備成苯蹤衍生物結(jié)晶。此外，層析法更是分離制備單體純品所常用的有效方法。有時(shí)可通過氧化鋁，硅膠或硅藻土短柱處理后，再進(jìn)行制備結(jié)晶。有時(shí)可選用溶劑溶出雜質(zhì)，或只溶出所需要的成分。有時(shí)即使有少量或微量雜質(zhì)存在，也能阻礙或延緩結(jié)晶的形成。因此，求得結(jié)晶并制備成單體純品，就成為鑒定中草藥成分、研究其分子結(jié)構(gòu)重要的一步。純化臺(tái)物的結(jié)晶有一定的熔點(diǎn)和結(jié)晶學(xué)的特征，有利于鑒定。一般他說，中草藥化學(xué)成分在常溫下多半是固體的物質(zhì)，都具有結(jié)晶他的通性，可以根據(jù)溶解度的不同用結(jié)晶法來達(dá)到分離精制的目的。鑒定中草藥化學(xué)成分，研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)，必須首先將中草藥成分制備成單體純品。 六、結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法： 其膜孔大小與硫酸濃度、浸泡時(shí)間以及用水沖洗速度有關(guān)；火棉膠膜系將火棉膠溶于乙醚及無水乙醇，涂在板上，干后放置水中即可供用，其膜孔大小與溶劑種類、溶劑揮發(fā)速度有關(guān)，溶劑中加入適量水可使膜孔增大，加入少量醋酸可使膜孔縮小；蛋白質(zhì)膠（明膠）膜可用20％明膠涂于細(xì)布上，陰干后放水中，再加甲醛使膜凝固，沖洗干凈即可供用。透析是否完全，須取透析膜內(nèi)溶液進(jìn)行定性反應(yīng)檢查。經(jīng)常更換清水使透析膜內(nèi)外溶液的濃度差加大，必要時(shí)適當(dāng)加熱，并加以攪拌，以利透析速度加快。透析膜有動(dòng)物性膜、火棉膠膜、羊皮紙膜（硫酸紙膜）、蛋白質(zhì)膠膜、玻璃紙膜等。反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi)，而將小分子的物質(zhì)通過半透膜進(jìn)入膜外溶液中，而加以分離精制：透析是否成功與透析膜的規(guī)格關(guān)系極大。透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。 五、透析法： 例如三七的水提取液中加硫酸鎂至飽和狀態(tài)，三七皂甙乙即可沉淀析出，自黃藤中提取掌葉防己堿，自三顆針中提取小檗堿在生產(chǎn)上都是用氯化鈉或硫酸按鹽析制備。 四、鹽析法：鹽析法是在中草藥的水提液中、加入無機(jī)鹽至一定濃度，或達(dá)到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離。此外，還可以用明膠、蛋白溶液沉淀鞣質(zhì)；膽甾醇也常用以沉淀洋地黃皂甙等。又如橙皮甙、蘆丁、黃芩甙、甘草皂甙均易溶于堿性溶液，當(dāng)加入酸后可使之沉淀析出。試劑沉淀法：例如在生物堿鹽的溶液中，加入某些生物堿沉淀試劑（見生物堿性質(zhì)下），則生物堿生成不溶性復(fù)鹽而析出。例如在黃芩水煎液中加入明礬溶液，黃芩甙就與鋁鹽絡(luò)合生成難溶于水的絡(luò)化物而與雜質(zhì)分離，這種絡(luò)化物經(jīng)用水洗凈就可直接供藥用。用陽離子交換樹脂脫鉛快而徹底，但要注意藥液中某些有效成分也可能被交換上去，同時(shí)脫鉛樹脂再生也較困難。新生態(tài)的硫化鉛多為膠體沉淀，能吸咐藥液中的有效成分，要注意用溶劑處理收回。含鉛鹽母液亦須先如法脫鉛處理，再濃縮精制。通常將中草藥的水或醇提取液先加入醋酸鉛濃溶液，靜置后濾出沉淀，并將沉淀洗液并入濾液，于濾液中加堿式醋酸鉛飽和溶液至不發(fā)生沉淀為止，這樣就可得到醋酸鉛沉淀物、堿式醋酸鉛沉淀物及母液三部分。因此，常用以沉淀有機(jī)酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、酸性皂甙、部分黃酮等。由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中，能與多種中草藥成分生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀，故可利用這種性質(zhì)使有效成分與雜質(zhì)分離。 　　1． 三、沉淀法： 液滴逆流分配法的裝置，近年來雖不斷在改進(jìn)，但裝置和操作較繁。本法必須選用能生成液滴的溶劑系統(tǒng)，且對(duì)高分子化合物的分離效果較差，處理樣品量?。?克以下），并要有一定設(shè)備。由于移動(dòng)相形成液滴，在細(xì)的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦不斷形成新的表面，促進(jìn)溶質(zhì)在兩相溶劑中的分配，故其分離效果往往比逆流分配法好。為近年來在逆流分配法基礎(chǔ)上改進(jìn)的兩相溶劑萃取法。但操作時(shí)間長，萃取管易因機(jī)械振蕩而損壞，消耗溶劑亦多，應(yīng)用上常受到一定限制。并參考分配層析的行為分析推斷和選用溶劑系統(tǒng)，通過試驗(yàn)測知要經(jīng)多少次的萃取移位而達(dá)到真正的分離。若無此儀器，小量萃取時(shí)可用分液漏斗代替。逆流分配法與兩相溶劑逆流萃取法原理一致，但加樣量一定，并不斷在一定容量的兩相溶劑中，經(jīng)多次移位萃取分配而達(dá)到混合物的分離。萃取是否完全，可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)進(jìn)行檢查。將氯仿盛于萃取管內(nèi)，而比重小于氯仿的水提取濃縮液貯于高位容器內(nèi)，開啟活塞，則水浸液在高位壓力下流入萃取管，遇瓷圈撞擊而分散成細(xì)粒，使與氯仿接觸面增大，萃取就比較完全。管內(nèi)用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填充，以增加兩相溶劑萃取時(shí)的接觸面。 　　2．逆流連續(xù)萃取法：是一種連續(xù)的兩相溶劑萃取法。　　萃取法所用設(shè)備，如為小量萃取，可在分液漏斗中進(jìn)行；如系中量萃取，可在較大的適當(dāng)?shù)南驴谄恐羞M(jìn)行。但親水性較大的成分不易轉(zhuǎn)入有機(jī)溶劑層時(shí)，須增加萃取次數(shù)，或改變萃取溶劑。溶劑與水溶液應(yīng)保持一定量的比例，第一次提取時(shí)，溶劑要多一些，一般為水提取液的1/3，以后的用量可以少一些，一般1/41/6。水提取液的濃度最好在比重1．1～1．2之間，過稀則溶劑用量太大，影響操作。乳化現(xiàn)象較嚴(yán)重時(shí)，可以采用二相溶劑逆流連續(xù)萃取裝置。如果容易產(chǎn)生乳化，大量提取時(shí)要避免猛烈振搖，可延長萃取時(shí)間。不過，一般有機(jī)溶劑親水性越大，與水作兩相萃取的效果就越不好，因?yàn)槟苁馆^多的親水性雜質(zhì)伴隨而出，對(duì)有效成分進(jìn)一步精制影響很大。提取黃酮類成分時(shí)，多用乙酸乙脂和水的兩相萃取。萃取時(shí)如果各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高、如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚進(jìn)行兩相萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。這些性質(zhì)均有助于各化合物的分離純化。有些總生物堿，如長春花生物堿、石蒜生物堿，可利用不同rH值進(jìn)行分離。一般中草藥總提取物用酸水、堿水先后處理，可以分為三部分：溶于酸水的為堿性成分（如生物堿），溶于堿水的為酸性成分（如有機(jī)酸），酸、堿均不溶的為中性成分（如甾醇）。例如內(nèi)酯類化合物不溶于水，但遇堿開環(huán)生成羧酸鹽溶于水，再加酸酸化，又重新形成內(nèi)酯環(huán)從溶液中析出，從而與其它雜質(zhì)分離；生物堿一般不溶于水，遇酸生成生物堿鹽而溶于水，再加堿堿化，又重新生成游離生物堿。目前，提取多糖及多肽類化合物，多采用水溶解、濃縮、加乙醇或丙酮析出的辦法。中草藥的水提液中常含有樹膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)、糊化淀粉等，可以加入一定量的乙醇，使這些不溶于乙醇的成分自溶液中沉淀析出，而達(dá)到與其它成分分離的目的。利用中草藥化學(xué)成分，在不同極性溶劑中的溶解度進(jìn)行分離純化，是最常用的方法。水浸膏或乙醇浸膏常常為膠伏物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌人適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。 一、溶劑分離法： . . . .中藥提取分離純化中草藥提取液或提取物仍然是混合物，需進(jìn)一步除去雜質(zhì)，分離并進(jìn)行精制。具體的方法隨各中草藥的性質(zhì)不同而異，以后將通過實(shí)例加以敘述，此處只作一般原則性的討論。一般是將上述總提取物，選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進(jìn)行提取分離。例如粉防己乙醇浸膏，堿化后可利用乙醚溶出脂溶性生物堿，再以冷苯處理溶出粉防己堿，與其結(jié)構(gòu)類似的防己諾林堿比前者少一甲基而有一酚羥基，不溶于冷苯而得以分離。 　　廣而言之，自中草藥提取溶液中加入另一種溶劑，析出其中某種或某些成分，或析出其雜質(zhì)，也是一種溶劑分離的方法。例如自中草藥提取液中除去這些雜質(zhì)，或自白及水提取液中獲得白及膠，可采用加乙醇沉淀法；自新鮮括樓根汁中制取天花粉素，可滴人丙酮使分次沉淀析出。 　　此外，也可利用其某些成分能在酸或堿中溶解，又在加堿或加酸變更溶液的pH后，成不溶物而析出以達(dá)到分離。這些化合物可以利用與水不相混溶的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取分離。還可利用不同酸、堿度進(jìn)一步分離，如酸性化臺(tái)物可以分為強(qiáng)酸性、弱酸性和酷熱酚性三種，它們分別溶于碳酸氫鈉、碳酸鈉和氫氧化鈉，借此可進(jìn)行分離。但有些特殊情況，如酚性生物堿紫董定堿（corydine）在氫氧化鈉溶液中仍能為乙醚抽出，蝙蝠葛堿（dauricins）在乙醚溶液中能為氫氧化鈉溶液抽出，而溶于氯仿溶液中則不能被氫氧化鈉溶液抽出；有些生物堿的鹽類，如四氫掌葉防己堿鹽酸鹽在水溶液中仍能為氯仿抽出。 二、兩相溶劑萃取法： 　1．萃取法：兩相溶劑提取又簡稱萃取法，是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的方法。還可以在氯仿、乙醚中加入適量乙醇或甲醇以增大其親水性。提取親水性強(qiáng)的皂甙則多選用正丁醇、異戊醇和水作兩相萃取。 　　兩相溶劑萃取在操作中還要注意以下幾點(diǎn)： 　　1）先用小試管猛烈振搖約1分鐘，觀察萃取后二液層分層現(xiàn)象。如碰到乳化現(xiàn)象，可將乳化層分出，再用新溶劑萃??；或?qū)⑷榛瘜映闉V，或?qū)⑷榛瘜由陨约訜?；或較長時(shí)間放置并不時(shí)旋轉(zhuǎn)，令其自然分層。 　　2） 　　3） 　　4）一般萃取3～4次即可。在工業(yè)生產(chǎn)中大量萃取，多在密閉萃取罐內(nèi)進(jìn)行，用攪拌機(jī)攪拌一定時(shí)間，使二液充分混合，再放置令其分層；有時(shí)將兩相溶液噴霧混含，以增大萃取接觸，提高萃取效率，也可采用二相溶劑逆流連續(xù)萃取裝置。其裝置可具有一根、數(shù)根或更多的萃取管。例如用氯仿從川楝樹皮的水浸液中萃取川楝素。如果一種中草藥的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進(jìn)行萃取，則需將水提濃縮液裝在萃取管內(nèi)，而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內(nèi)。 　　3．逆流分配法（CounterCurrentDistribution，CCD）：逆流分配法又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。本法所采用的逆流分布儀是由若干乃至數(shù)百只管子組成。預(yù)先選擇對(duì)混合物分離效果較好，即分配系數(shù)差異大的兩種不相混溶的溶劑。逆流分配法對(duì)于分離具有非常相似性質(zhì)的混合物，往往可以取得良好的效果。4．液滴逆流分配法：液滴逆流分配法又稱液滴逆流層析法。對(duì)溶劑系統(tǒng)的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時(shí)間內(nèi)分離成兩相，并可生成有效的液滴。且不會(huì)產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，用氮?dú)鈮候?qū)動(dòng)移動(dòng)相，被分離物質(zhì)不會(huì)因遇大氣中氧氣而氧化。應(yīng)用液滴逆流分配法曾有效地分離多種微量成分如柴胡皂甙原小檗堿型季銨堿等。目前，對(duì)適用于逆流分配法進(jìn)行分離的成分，可采用兩相溶劑逆流連續(xù)萃取裝置或分配柱層析法進(jìn)行。是在中草藥提取液中加入某些試劑使產(chǎn)生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方法。鉛鹽沉淀法：鉛鹽沉淀法為分離某些中草藥成分的經(jīng)典方法之一。中性醋酸鉛可與酸性物質(zhì)或某些酚性物質(zhì)結(jié)合成不溶性鉛鹽?？膳c堿式醋酸鉛產(chǎn)生不溶性鉛鹽或絡(luò)合物的范圍更廣。 　　然后將鉛鹽沉淀懸浮于新溶劑中，通以硫化氫氣體，使分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛而沉淀。硫化氫脫鉛比較徹底，但溶液中可能存有多余的硫化氫，必須先通人空氣或二氧化碳讓氣泡帶出多余的硫化氫氣體，以免在處理溶液時(shí)參與化學(xué)反應(yīng)。脫鉛方法，也可用硫酸、磷酸、硫酸鈉、磷酸鈉等除鉛，但硫酸鉛、磷酸鉛在水中仍有一定的溶解度，除鉛不徹底。還應(yīng)注意脫鉛后溶液酸度增加，有時(shí)需中和后再處理溶液，有時(shí)可用新制備的氫氧化鉛、氫氧化鋁、氫氧化銅或碳酸鉛、明礬等代替醋酸鉛、堿式醋酸鉛。 　　2．水溶性生物堿難以用萃取法提取分出，常加入雷氏銨鹽使生成生物堿雷氏鹽沉淀析出。某些蛋白質(zhì)溶液，可以變更溶液的pH值利用其在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最小的性質(zhì)而使之沉淀析出?？筛鶕?jù)中草藥有效成分和雜質(zhì)的性質(zhì)，適當(dāng)選用。常用作鹽析的無機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。有些成分如原白頭翁素、麻黃堿、苦參堿等水溶性較大，在提取時(shí)，亦往往先在水提取液中加入一定量的食鹽，再用有機(jī)溶劑萃取。例如分離和純化皂甙、蛋白質(zhì)、多肽、多糖等物質(zhì)時(shí)，可用透析法以除去無機(jī)鹽、單糖、雙糖等雜質(zhì)。透析膜的膜孔有大有小，要根據(jù)欲分離成分的具體情況而選擇。油常多用市售的玻璃紙或動(dòng)物性半透膜扎成袋狀，外面用尼龍網(wǎng)袋加以保護(hù)，小心加入欲透析的樣品溶液，懸掛在清水容器中。為了加快透析速度，還可應(yīng)用電透析法，即在半在半透膜旁邊純?nèi)軇﹥啥?　　放置二個(gè)電極，接通電路，則透析膜中的帶有正電荷的成分如無機(jī)陽離子、生物堿等向陰極移動(dòng)，而帶負(fù)電共荷的成分如無機(jī)陰離子、有機(jī)酸等則向陽極移動(dòng)，中性化合物及高分子化合物則留在透析膜中。 　　一般透析膜可以自制：動(dòng)物半透膜如豬、牛的膀胱膜、用水洗凈，再以乙醚脫脂，即可供用；羊皮紙膜可將濾紙浸入50％的硫酸15～60分鐘，取出鋪在板上，以水沖洗制得。近來商品有透析膜管成品出售，國外習(xí)稱“ViskingDialysisTubing”，有各種大小厚度規(guī)格，可供不同大小分子量的多糖、多肽透析時(shí)選用。在常溫下，物質(zhì)本身性質(zhì)是液體的化臺(tái)物，可分別用分餾法或?qū)游龇ㄟM(jìn)行分離精制。研究中草藥化學(xué)成分時(shí)，一旦獲得結(jié)晶，就能有效地進(jìn)一步精制成為單體純品。如果鑒定的物質(zhì)不是單體純品，不但不能得出正確的結(jié)論，還會(huì)造成工作上的浪費(fèi)。1．雜質(zhì)的除去：中草藥經(jīng)過提取分離所得到的成分，大多仍然含有雜質(zhì)，或者是混合成分。所以在制備結(jié)晶時(shí)，必須注意雜質(zhì)的干擾，應(yīng)力求盡可能除去。有時(shí)可用少量活性炭等進(jìn)行脫色處理，以除去有色雜質(zhì)。但應(yīng)用吸附劑除去雜質(zhì)時(shí)，要注意所需要的成分也可能被吸附而損失。 　　如果一再處理仍未能使近于純品的成分結(jié)晶化，則可先制備其晶態(tài)的衍生物，再回收原物，可望得到結(jié)晶。美登堿在原料中含量少，且反復(fù)分離精制難以得到結(jié)晶，但制備成3一滇丙基美登堿結(jié)晶后，再經(jīng)水解除去澳丙基，美登堿就能制備成為結(jié)晶。合宜的溶劑，最好是在冷時(shí)對(duì)所需要的成分溶解度較小，而熱時(shí)溶解度較大。一般常用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙醋等。例如葛根素、逆沒食子