【正文】 圖譜方法驗證指紋圖譜實驗方法驗證的目的是為了考察和證明采用的指紋圖譜測定方法具有可靠性和可重復(fù)性，符合指紋圖譜測定的要求。（2）指紋圖譜方法認證①需要證明獲取的指紋圖譜能夠表征該中藥產(chǎn)品的化學(xué)組成。指紋圖譜的辨識應(yīng)注意指紋特征的整體性。如色譜指紋圖譜的試驗條件確立后，應(yīng)將獲取的所有樣品的指紋圖譜逐一研究比較。方法和條件須經(jīng)過方法學(xué)驗證。指紋圖譜試驗條件應(yīng)能滿足指紋圖譜的需要，不宜簡單套用含量測定用的試驗條件，并需根據(jù)指紋圖譜的特點進行試驗條件的優(yōu)化選擇。須注意各種技術(shù)的特點和不足，結(jié)合實際選用。③指紋圖譜獲取實驗指紋圖譜獲取首選色譜方法，主要有液相色譜、薄層色譜、氣相色譜及其他色譜技術(shù)。參照物應(yīng)說明名稱、來源和純度。②參照物參照物的選擇：指紋圖譜的參照物質(zhì)一般選取容易獲取的一個或一個以上制劑中的主要活性成分或指標(biāo)成分，主要用于考察指紋圖譜的穩(wěn)定程度和重現(xiàn)性，并有助于指紋圖譜的辨認。對于化學(xué)成分類別相差較大的樣品，可根據(jù)類別成分的性質(zhì)，按照分析要求，對樣品分別進行預(yù)處理，用于制備2張以上的指紋圖譜。供試品溶液的制備需按照具體的分析對象，在對樣品基本特性進行了解的情況下，采用規(guī)范的處理方式進行供試品溶液制備。因此，供試品的制備必須保證能夠充分地反映出樣本的基本特性，同時也必須保證待測樣品所含特性的完整性。中藥指紋圖譜的一般獲取規(guī)程如下：①供試品溶液的制備在中藥指紋圖譜測試中，制備供試品的基本原則是代表性和完整性。在滿足表征中藥化學(xué)成分群整體性質(zhì)的前提下，要求有較好的重現(xiàn)性，應(yīng)根據(jù)重現(xiàn)性要求選用合適的分析方法來獲取指紋圖譜。（1）中藥指紋圖譜分析方法的建立中藥指紋圖譜應(yīng)滿足專屬性、重現(xiàn)性和可操作性。中藥指紋圖譜按照測試樣品來源可以分為中藥材、飲片、提取物或中間體、成方制劑指紋圖譜其中中藥材、飲片及中間體指紋圖譜主要是用于生產(chǎn)的內(nèi)部控制、質(zhì)量調(diào)整以及質(zhì)量相關(guān)性考察。其具體試驗是采用指紋圖譜模式，將中藥內(nèi)在物質(zhì)特性轉(zhuǎn)化為常規(guī)數(shù)據(jù)信息，用于中藥鑒別和質(zhì)量評價。（5）實驗過程要防止外源DAN的污染。（3）PCR反應(yīng)條件的確定 通過實驗，優(yōu)化PCR反應(yīng)條件、參數(shù)，并提供研究數(shù)據(jù)。 （1）DNA提取、純化方法的考察 通過多種方法的優(yōu)化，建立切實可行的DNA提取、純化方法，確定最佳條件，獲取高質(zhì)量的藥材總DNA，并提供研究數(shù)據(jù)。DNA分子標(biāo)記鑒別 DNA分子標(biāo)記鑒別是指通過比較藥材間DNA 分子遺傳多樣性差異來鑒別藥材基源、確定學(xué)名的方法。氣相色譜鑒別（1）應(yīng)根據(jù)被測物的性質(zhì)，選用合適的色譜柱、填料、固定相、涂布濃度、檢測器等進行系統(tǒng)適應(yīng)性試驗，確定進樣口溫度、柱溫、檢測器溫度、考察色譜分離的效果、分離度等參數(shù)。液相色譜鑒別（1）應(yīng)根據(jù)被測物的性質(zhì)選用適宜的色譜柱、流動相（注意流動相的pH值與色譜柱的pH值范圍相適應(yīng)，盡量避免使用緩沖溶液）檢測器等，進行系統(tǒng)適用性試驗，考察分離度、重復(fù)性、理論板數(shù)等參數(shù)，選擇最佳色譜條件。（5）除需要改性，一般應(yīng)采用預(yù)制的商品薄層板。 （4）由于實驗時的溫度、濕度常會影響薄層色譜結(jié)果，因此，建立方法時應(yīng)對上述因素進行考察。（3） 為了使圖譜清晰，斑點明顯，分離度與重現(xiàn)性符合要求，應(yīng)根據(jù)被測物的特性選擇合適的固定相、展開劑及顯色方法等色譜條件。當(dāng)對照品不易獲得時，采用以對照藥材為對照；某些鑒別被測物為單一成分的，可以只采用對照品進行對照；不宜采用Rf值表述色譜行為。薄層色譜鑒別薄層色譜可將中藥內(nèi)含成分通過分離達到直觀、可視化，具有承載信息大、專屬性強、快速、經(jīng)濟、操作簡便等優(yōu)點，可作為中藥鑒別的首選方法。理化鑒別理化鑒別包括一般理化鑒別，熒光鑒別及光譜鑒別等方法，中藥成分復(fù)雜，應(yīng)根據(jù)所含成分的化學(xué)性質(zhì)選擇適宜的專屬性方法。凡有下列情況的藥材，應(yīng)盡量規(guī)定顯微鑒別：藥材組織構(gòu)造特殊或有明顯特征，可以區(qū)別外形相似或破碎不易識別的類似品、偽品；或某些常以粉末入藥、而又無專屬性理化鑒別方法的藥材，尤其是毒性或貴重藥材。顯微鑒別應(yīng)按照一定的收錄原則、書寫順序和文法進行規(guī)范描述，以使標(biāo)準(zhǔn)簡潔明了，可操作性強。實驗中應(yīng)注重綠色環(huán)保要求，盡量采用毒害小、污染少的試劑、試藥，避免使用苯等毒性大的溶劑；并盡量采用《中國藥典》附錄中已收載的試劑與試液(一)鑒別試驗鑒別試驗應(yīng)符合重現(xiàn)性、專屬性和耐用性的驗證要求，根據(jù)藥品的性質(zhì)可分別采用顯微鑒別、理化鑒別與色譜鑒別等方法，制定的色譜鑒別方法應(yīng)能反映該藥的整體特性。要提高中藥檢測方法的專屬性，建立科學(xué)合理的控制指標(biāo)。實驗記錄書寫應(yīng)真實、完整、清晰，保持原始性并具有可追溯性，應(yīng)按要求建檔永久保存。若使用的對照物質(zhì)是自行研制的，應(yīng)按照相關(guān)的要求申報相應(yīng)的鑒定研究資料和對照物質(zhì)。樣品保存應(yīng)符合各品種項下的貯藏要求。三、供起草用樣品及對照物質(zhì)的要求供研究用樣品應(yīng)具有代表性，覆蓋面要廣，一般至少應(yīng)收集10批以上樣品供研究用。二、實驗室條件及人員的要求承擔(dān)《中國藥典》等國家藥品標(biāo)準(zhǔn)起草任務(wù)的單位應(yīng)具有通過計量認證并能滿足起草任務(wù)要求的實驗室，具有相應(yīng)技術(shù)人員，具備中藥研究、檢驗常用儀器和設(shè)備，能確保實驗用試劑、試藥及對照物質(zhì)符合規(guī)定。堅持標(biāo)準(zhǔn)發(fā)展的國際化原則注重新技術(shù)和新方法的應(yīng)用，積極采用國際藥品標(biāo)準(zhǔn)的先進方法，加快與國際接軌的步伐。所建立的檢測方法應(yīng)專屬、準(zhǔn)確、精密。堅持科學(xué)、實用、規(guī)范的原則 制定、修訂藥品標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)充分考慮來源、生產(chǎn)、流通及使用等各個環(huán)節(jié)影響藥品質(zhì)量的因素，設(shè)置科學(xué)的檢測項目、建立可靠的檢測方法、規(guī)定合理的判斷標(biāo)準(zhǔn)；在確保能準(zhǔn)確控制質(zhì)量的前提下，應(yīng)倡導(dǎo)簡單實用；藥品標(biāo)準(zhǔn)的體例格式、文字術(shù)語、計量單位、數(shù)字符號以及通用檢測方法等應(yīng)統(tǒng)一規(guī)范?？? 則一、基本原則堅持提高藥品質(zhì)量、維護公眾健康的原則藥品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)貫徹落實科學(xué)監(jiān)管理念，支持國家藥品監(jiān)督管理發(fā)展的需要，保障藥品質(zhì)量與用藥安全，維護人民健康，促進我國醫(yī)藥事業(yè)的健康發(fā)展。附件：《中國藥典》中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究制定技術(shù)要求國家藥典委員會為編制好《中國藥典》等國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，體現(xiàn)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定符合中藥的特點，保證中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所設(shè)定的方法與指標(biāo)基本能控制中藥質(zhì)量，規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)起草工作，特制定本技術(shù)要求。本技術(shù)要求由總則和各論二部分組成，各論又分為中藥材及飲片、植物油脂和提取物、中藥成方制劑三部分。堅持繼承、發(fā)展、創(chuàng)新的原則堅持繼承與發(fā)展相結(jié)合，鼓勵自主創(chuàng)新，加大自主知識產(chǎn)權(quán)的標(biāo)準(zhǔn)研究力度，促進科學(xué)研究與標(biāo)準(zhǔn)化工作的有效結(jié)合，提高我國藥品標(biāo)準(zhǔn)中自主創(chuàng)新技術(shù)含量，使我國醫(yī)藥領(lǐng)域的自主創(chuàng)新技術(shù)通過標(biāo)準(zhǔn)快速轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力，提高我國藥品的國際競爭力。堅持質(zhì)量可控性原則國家藥品標(biāo)準(zhǔn)適用于對合法生產(chǎn)的藥品質(zhì)量進行控制。堅持標(biāo)準(zhǔn)先進性原則《中國藥典》所載藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)充分反映現(xiàn)階段國內(nèi)外藥品質(zhì)量控制的先進水平，對于多企業(yè)生產(chǎn)的同一品種，其標(biāo)準(zhǔn)的制定應(yīng)在科學(xué)合理的基礎(chǔ)上堅持就高不就低的標(biāo)準(zhǔn)先進性原則。促進我國藥品標(biāo)準(zhǔn)特別是中藥標(biāo)準(zhǔn)的國際化。承擔(dān)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的人員應(yīng)具有相關(guān)專業(yè)中級以上技術(shù)職稱、五年以上中藥檢驗、研究工作經(jīng)歷，并有一定的標(biāo)準(zhǔn)研究和起草經(jīng)驗。樣品量除滿足起草研究、留樣觀察外，還應(yīng)有不少于3倍檢驗量的樣品供復(fù)核用。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定應(yīng)使用國家法定部門認可的對照物質(zhì)（包括對照品、對照提取物和對照藥材）。四、編寫要求標(biāo)準(zhǔn)正文應(yīng)按“《中國藥典》中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文各論編寫細則”的要求編寫；標(biāo)準(zhǔn)起草說明應(yīng)按“《中國藥典》中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說明編寫細則”的要求編寫。五、檢測方法和檢測指標(biāo)的制定中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定要體現(xiàn)中藥的特點，其檢測方法和檢測指標(biāo)的制定要脫離化學(xué)藥品單一成分定性定量的模式，要體現(xiàn)復(fù)雜體系整體控制的設(shè)計思想，以建立符合中醫(yī)藥特點的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，逐步由單一指標(biāo)性成分定性定量向活性、有效成分及生物測定的綜合檢測過渡，向多成分、組分測定及指紋或特征圖譜整體質(zhì)量控制模式轉(zhuǎn)化。要注重中藥安全性檢測方法和指標(biāo)的建立和完善，加強對重金屬及有害元素、殘留農(nóng)藥、殘留溶劑、殘留二氧化硫、微生物、真菌毒素等外源污染物的檢測。顯微鑒別系指利用顯微鏡對藥材(飲片)切片、粉末、解離組織或表面以及含有藥材粉末的制劑進行觀察，并根據(jù)組織、細胞或內(nèi)含物等特征進行相應(yīng)藥材鑒別的一種方法。應(yīng)選擇容易觀察、具有鑒別意義的專屬特征列入標(biāo)準(zhǔn)。成方制劑顯微鑒別，原則上應(yīng)對處方中所有以粉末投料的藥材逐一進行研究，選擇特征性強、與處方中其它藥味無交叉干擾的顯微特征作為鑒別依據(jù)，所收載的特征應(yīng)明顯、易于檢出。對于不易達到專屬性要求的一般理化鑒別、熒光鑒別及光譜鑒別，一般不宜采用。（1）在建立方法時，盡量采用以對照品和對照藥材或?qū)φ仗崛∥锿瑫r進行對照。（2）供試品溶液的制備應(yīng)盡可能除去干擾色譜的雜質(zhì)，同時方法要盡量簡便，應(yīng)視被測物的特性來選擇適宜的溶劑和方法進行提取、分離。確定供試品取樣量、提取和純化方法、點樣量等條件；選擇合適的對照物質(zhì)，確定對照物質(zhì)用量、濃度、溶劑、點樣量等。如有必要，應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)正文中注明溫、濕度要求。不同品牌的薄層板或自制薄層板的薄層色譜結(jié)果有一定的差異，因此應(yīng)對其進行考察選擇適宜的薄層板。（2）確定供試品取樣量，提取和純化方法，稀釋度、進樣量；對照物質(zhì)用量、濃度、溶劑、進樣量等。（2）確定供試品取樣量，提取和純化方法，稀釋度、進樣量；對照物質(zhì)用量、濃度、溶劑、進樣量等。適用于采用性狀、顯微、理化以及色譜鑒別等方法難以鑒定的樣品的鑒別，如同屬多基源物種、動物藥等的鑒別。（2）DNA分子標(biāo)記方法的確定 通過多種方法對多樣品的比較，確定適于目的物鑒別的分子標(biāo)記方法，優(yōu)化各種條件、參數(shù)，并提供研究數(shù)據(jù)。（4）電泳檢查：通過實驗，優(yōu)化瓊脂糖凝膠電泳條件、參數(shù)，并提供研究數(shù)據(jù)。中藥指紋圖譜技術(shù)中藥指紋圖譜建立的目的是通過對所得到的能夠體現(xiàn)中藥整體特性的圖譜識別，提供一種能夠比較全面的控制中藥質(zhì)量的方法，從化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)的角度保證中藥制劑的穩(wěn)定和可靠。中藥指紋圖譜建立的內(nèi)容包括：中藥指紋圖譜分析方法的建立、指紋圖譜方法認證、方法驗證、數(shù)據(jù)處理和分析。中藥指紋圖譜按照獲取方式可以分為色譜、光譜及其他分析手段，其中色譜是中藥指紋圖譜建立的首選和主要方式。其首要目的是能體現(xiàn)中藥的整體特征。指紋圖譜分析方法的可操作性系指針對不同用途，選用不同方法來達到不同的要求。供試品的制備是整個分析步驟中關(guān)鍵的起始部分，供試品制備的好壞直接影響了整體分析結(jié)果的優(yōu)劣及可信程度。主要操作過程及數(shù)據(jù)應(yīng)詳細記錄。操作過程應(yīng)按照定量測定的要求，保證樣品物質(zhì)信息不減失、不轉(zhuǎn)化。主要步驟及數(shù)據(jù)應(yīng)詳細記錄。在與臨床藥效未能取得確切關(guān)聯(lián)的情形下，參照物（復(fù)方制劑劑應(yīng)首選君藥的活性成分或指標(biāo)成分）起著辨認和評價指紋圖譜特征的指引作用，不等同于含量測定的對照品。如無合適參照物也可選指紋圖譜中的穩(wěn)定的指紋峰做為參照峰，說明其響應(yīng)行為和有關(guān)數(shù)據(jù)，并應(yīng)盡可能闡明其化學(xué)結(jié)構(gòu)及化學(xué)名稱。光譜方法和其他分析方法在指紋圖譜獲取中可作為快速鑒別和輔助鑒別使用，在確定其與常規(guī)色譜方法的相關(guān)性以后可以考慮替換使用，但需慎重。選用的原則是必須具有良好的專屬性、重現(xiàn)性和可操作性。試驗方法和試驗條件選擇應(yīng)根據(jù)供試品的特點和需要設(shè)計合適的試驗方案，通過比較實驗，從中選取相對簡單易行的方法和條件，獲取足以代表品種特征的指紋圖譜，以滿足指紋圖譜的專屬性、重現(xiàn)性和可操作性的要求。④指紋圖譜的建立和辨識指紋圖譜建立和辯識的主要目的是確定獲取的指紋圖譜中具有指紋意義的特征峰，并能體現(xiàn)其整體性。一張對照用指紋圖譜，特別是分辨率較高的圖譜，必須制備有足夠代表性的樣品的圖譜，找出成品色譜具有指紋意義的各個峰，給以編號，再將藥材、中間體和成品之間的圖譜比較，考察相互之間的相關(guān)性。辨識時應(yīng)從整體的角度綜合考慮，注意各有圖譜（共有模式）之間的相似性，即“相似度”進行表達。②各原藥材的化學(xué)組成特征應(yīng)該在中藥產(chǎn)品的譜圖中得到體現(xiàn)。中藥指紋圖譜測定是一個復(fù)雜的分析過程，影響因素多，條件繁雜，合理的實驗方法有效性評價是對測定整體過程和分析系統(tǒng)的綜合驗證，需要在制定指紋圖譜方法時充分考慮。方法驗證的具體內(nèi)容如下。中藥供試品中物質(zhì)一般分為：有效成分或活性成分、指標(biāo)成分、輔助成分、雜質(zhì)和基質(zhì)等。如色譜指紋圖譜中，一般認為在分離峰越多越好，大多數(shù)成分均能有響應(yīng)的情況下，用典型的色譜圖來證明其專屬性，并盡可能在圖上恰當(dāng)?shù)貥?biāo)出可確定的成分。同時需要評價有關(guān)樣品（藥材、中間品和成品）間的相關(guān)性，并盡可能顯示出樣品中特征響應(yīng)，保證其有較大響應(yīng)，從而減少方法的波動帶來判別誤差。② 精密度(Precision)：精密度是指規(guī)定