【正文】 ........................................................................... 8 高 效 液 相 色 譜 法 (HPLC) .................................................... 8 聯(lián) 用 技 術 分 析 法 .................................................................. 10 分 光 光 度 法 ............................................................................... 12 免 疫 分 析 法 （ IA） .................................................................... 13目 錄 II 總 結 .......................................................................................... 14第二章 實驗方法 ......................................................................................... 17 原理 ................................................................................................................ 17 儀器和設備 .................................................................................................... 17 試劑與溶液 .................................................................................................... 18 主 要 試 劑 .................................................................................. 18 主 要 溶 液 的 配 制 ...................................................................... 18 標 準 物 質 和 標 準 溶 液 ............................................................... 19 實驗方法 ........................................................................................................ 20 試 樣 制 備 與 保 存 ...................................................................... 20 分 析 步 驟 .................................................................................. 20 洗 樣 .................................................................................... 20 水 解 .................................................................................... 20 提 取 和 凈 化 ......................................................................... 20 儀 器 參 數(shù) 與 設 定 ................................................................. 21 液 相 色 譜 串 聯(lián) 質 譜 測 定 ..................................................... 22 定 性 方 法 ............................................................................. 22 定 量 方 法 ............................................................................. 23第三章 結果計算及討論 ............................................................................... 24 結果計算 ........................................................................................................ 24 總離子流圖和保留時間 ................................................................................ 24 樣品衍生條件的優(yōu)化 .................................................................................... 25 凈化條件的選擇 ............................................................................................ 26 質譜條件的優(yōu)化 ............................................................................................. 26 檢測限、測定低限、回收率和精密度 ......................................................... 29 回 收 率 統(tǒng) 計 .............................................................................. 29 重 復 性 統(tǒng) 計 .............................................................................. 33 內標法定量 .................................................................................................... 38 標準曲線圖譜及線性范圍 ............................................................................ 39目 錄 III 標 準 曲 線 圖 譜 .......................................................................... 39 線 性 范 圍 .................................................................................. 41 質量控制及注意事項 .................................................................................... 41 質 量 控 制 .................................................................................. 41 注 意 事 項 .................................................................................. 42結論 ............................................................................................................. 44參考文獻 ...................................................................................................... 45致謝及聲明 .................................................................................................. 48 目 錄 IV 第一章 引 言 0 第一章 引 言 硝基呋喃類藥物的性質和使用硝基呋喃類藥物(Nitrofurans)是人工合成的具有5硝基呋喃基本結構的廣譜抗菌藥物，對大多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌、某些真菌和原蟲均有作用，在低濃度下對上述病原體有抑制作用，高濃度則有殺滅作用，其抗菌作用機理是干擾細菌體內的氧化還原酶系統(tǒng)，使細菌代謝紊亂 [1]。硝基呋喃類抗生素主要包括呋喃唑酮(Furazolidone) 、呋喃它酮(Furaltadone)、呋喃西林(Nitrofurazone)、呋喃妥因(Nitrofurantoin)等，見圖 11，呋喃類物質均為性質穩(wěn)定的黃色粉末，無味或味微苦。圖11 四種硝基呋喃代謝物結構式第一章 引 言 1 這類抗生素因其具有抑菌性和殺菌性而廣泛用于家禽、家畜、水產、蜂等動物傳染病的預防與治療，部分品種具有促生長的作用，可用作飼料添加劑。其中呋喃唑酮內服后難吸收，腸中濃度高而血中濃度低，故適用于各種腸道感染的治療，呋喃唑酮可用于治療小兒菌痢、傷寒、消化性潰瘍等疾病，呋喃唑酮的復方緩釋制劑是衛(wèi)生部批準的抗HP(HP 是胃潰瘍的主要致病菌)感染的藥物。呋喃唑酮用于羅氏沼蝦、鰻鱺、對蝦和河蟹等水生動物養(yǎng)殖環(huán)境的消毒藥物。呋喃妥因內服吸收較快，體內消除快，此藥由尿的排出量大，故主要用于治療尿道感染；而呋喃西林在本類藥物中毒性最大，主要用作局部或創(chuàng)傷的感染的外用消毒劑。大劑量或長時間應用硝基呋喃類藥物均能對畜禽產生毒性作用，其中呋喃西林的毒性最大，呋喃唑酮的毒性最小，為呋喃西林的1/10左右。獸醫(yī)臨床上經常出現(xiàn)有關豬、鴨、羊、鴿子等呋喃唑酮中毒的事件報道。呋喃它酮為強致癌性藥物，呋喃唑酮具中等強度致癌性。硝基呋喃類化合物是直接致變劑，它不用附加外源性激活系統(tǒng)就可以引起細菌的突變。硝基呋喃類藥物在體內代謝迅速，代謝第一章 引 言 2 的部分化合物分子與細胞膜蛋白結合成為結合態(tài)，結合態(tài)可長期保持穩(wěn)定，從而延緩藥物在體內的消除速度。普通的食品加工方法(如燒烤、微波加工、烹調等)難以使蛋白結合態(tài)呋喃唑酮殘留物大量降解。動物肝臟為主要的藥物代謝器官，蛋白質結合態(tài)的殘留藥物主要累積在肝臟。歐盟(EU)從 1997 年開始將所有的硝基呋喃類抗生素全部列為違禁藥物。由于對呋喃唑酮蛋白結合態(tài)殘留物的安全性產生懷疑，自 1995 年起歐盟全面規(guī)定禁止使用呋喃類抗菌物質，在動物源性食品中呋喃類殘留物的檢出限為不得檢出。2022 年美國 FDA 公布了禁止在進口動物源性食品中使用的 11 種藥物名單，其中包括呋喃西林和呋喃唑酮。美國 規(guī)定：食源性動物禁止使用呋喃唑酮和呋喃妥因。歐盟EEC2377/90 規(guī)定動物源性食品中不得檢出硝基呋喃 (包括呋喃唑酮)。我國目前使用行業(yè)標準 SN0530－1996 出口肉品中呋喃唑酮殘留量檢驗方法:液相色譜法，檢測限量 [45]。但是硝基呋喃類藥物殘留超標事件時有發(fā)生，嚴重危及動物源性食品安全和出口，因此，必須進一步強化對硝基呋喃類藥物的管理。要廣泛宣傳畜禽健康養(yǎng)殖知識、國家安全用藥的有關法律法規(guī)和藥物殘留對人類健康的危害性，讓廣大養(yǎng)殖者了解使用禁用藥后產生的危害及法律后果，提高養(yǎng)殖者的法律意識和安全用藥的自覺性。嚴格按照獸藥管理條例、獸藥生產質量管理規(guī)范GMP 和獸藥經營管理規(guī)范GSP 的要求規(guī)范生產經營行為，加大對生產、經營企業(yè)的監(jiān)督管理，嚴厲查處生產、經營禁用藥的行為。加強對飼料生產企業(yè)的監(jiān)控，嚴禁使用農業(yè)部規(guī)定以外的獸藥作為飼料添加劑。（4）加強畜禽養(yǎng)殖的管理。養(yǎng)殖場應當建立養(yǎng)殖檔案，載明飼料、飼料添加劑等投入品和獸藥的來源、名稱、使用對象、時間和用量等有關情況，禁止使用硝基呋喃等違禁藥物。加大投入，盡快建設完善我國動物源性食品的獸藥殘留監(jiān)控體系，形成國家、省、市、縣完整的獸藥殘留檢測網絡梯級結構；加快我國獸藥殘留監(jiān)控檢測方法的研究步伐，發(fā)展簡單快速準確靈敏的分析技術；加強對生產、加工和流通環(huán)節(jié)的監(jiān)管，加大對養(yǎng)殖場、加工廠和農貿市場等畜禽及產品的抽樣檢測力度。 樣品的均質 取樣時，通常僅取可食部分，并注意具有代表性。盡量避免將整個樣品一次均相，引起酶的活性