【正文】 ........................................................................... 8 高 效 液 相 色 譜 法 (HPLC) .................................................... 8 聯(lián) 用 技 術(shù) 分 析 法 .................................................................. 10 分 光 光 度 法 ............................................................................... 12 免 疫 分 析 法 （ IA） .................................................................... 13目 錄 II 總 結(jié) .......................................................................................... 14第二章 實(shí)驗(yàn)方法 ......................................................................................... 17 原理 ................................................................................................................ 17 儀器和設(shè)備 .................................................................................................... 17 試劑與溶液 .................................................................................................... 18 主 要 試 劑 .................................................................................. 18 主 要 溶 液 的 配 制 ...................................................................... 18 標(biāo) 準(zhǔn) 物 質(zhì) 和 標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液 ............................................................... 19 實(shí)驗(yàn)方法 ........................................................................................................ 20 試 樣 制 備 與 保 存 ...................................................................... 20 分 析 步 驟 .................................................................................. 20 洗 樣 .................................................................................... 20 水 解 .................................................................................... 20 提 取 和 凈 化 ......................................................................... 20 儀 器 參 數(shù) 與 設(shè) 定 ................................................................. 21 液 相 色 譜 串 聯(lián) 質(zhì) 譜 測(cè) 定 ..................................................... 22 定 性 方 法 ............................................................................. 22 定 量 方 法 ............................................................................. 23第三章 結(jié)果計(jì)算及討論 ............................................................................... 24 結(jié)果計(jì)算 ........................................................................................................ 24 總離子流圖和保留時(shí)間 ................................................................................ 24 樣品衍生條件的優(yōu)化 .................................................................................... 25 凈化條件的選擇 ............................................................................................ 26 質(zhì)譜條件的優(yōu)化 ............................................................................................. 26 檢測(cè)限、測(cè)定低限、回收率和精密度 ......................................................... 29 回 收 率 統(tǒng) 計(jì) .............................................................................. 29 重 復(fù) 性 統(tǒng) 計(jì) .............................................................................. 33 內(nèi)標(biāo)法定量 .................................................................................................... 38 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖譜及線性范圍 ............................................................................ 39目 錄 III 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 圖 譜 .......................................................................... 39 線 性 范 圍 .................................................................................. 41 質(zhì)量控制及注意事項(xiàng) .................................................................................... 41 質(zhì) 量 控 制 .................................................................................. 41 注 意 事 項(xiàng) .................................................................................. 42結(jié)論 ............................................................................................................. 44參考文獻(xiàn) ...................................................................................................... 45致謝及聲明 .................................................................................................. 48 目 錄 IV 第一章 引 言 0 第一章 引 言 硝基呋喃類藥物的性質(zhì)和使用硝基呋喃類藥物(Nitrofurans)是人工合成的具有5硝基呋喃基本結(jié)構(gòu)的廣譜抗菌藥物，對(duì)大多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌、某些真菌和原蟲均有作用，在低濃度下對(duì)上述病原體有抑制作用，高濃度則有殺滅作用，其抗菌作用機(jī)理是干擾細(xì)菌體內(nèi)的氧化還原酶系統(tǒng)，使細(xì)菌代謝紊亂 [1]。硝基呋喃類抗生素主要包括呋喃唑酮(Furazolidone) 、呋喃它酮(Furaltadone)、呋喃西林(Nitrofurazone)、呋喃妥因(Nitrofurantoin)等，見圖 11，呋喃類物質(zhì)均為性質(zhì)穩(wěn)定的黃色粉末，無(wú)味或味微苦。圖11 四種硝基呋喃代謝物結(jié)構(gòu)式第一章 引 言 1 這類抗生素因其具有抑菌性和殺菌性而廣泛用于家禽、家畜、水產(chǎn)、蜂等動(dòng)物傳染病的預(yù)防與治療，部分品種具有促生長(zhǎng)的作用，可用作飼料添加劑。其中呋喃唑酮內(nèi)服后難吸收，腸中濃度高而血中濃度低，故適用于各種腸道感染的治療，呋喃唑酮可用于治療小兒菌痢、傷寒、消化性潰瘍等疾病，呋喃唑酮的復(fù)方緩釋制劑是衛(wèi)生部批準(zhǔn)的抗HP(HP 是胃潰瘍的主要致病菌)感染的藥物。呋喃唑酮用于羅氏沼蝦、鰻鱺、對(duì)蝦和河蟹等水生動(dòng)物養(yǎng)殖環(huán)境的消毒藥物。呋喃妥因內(nèi)服吸收較快，體內(nèi)消除快，此藥由尿的排出量大，故主要用于治療尿道感染；而呋喃西林在本類藥物中毒性最大，主要用作局部或創(chuàng)傷的感染的外用消毒劑。大劑量或長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用硝基呋喃類藥物均能對(duì)畜禽產(chǎn)生毒性作用，其中呋喃西林的毒性最大，呋喃唑酮的毒性最小，為呋喃西林的1/10左右。獸醫(yī)臨床上經(jīng)常出現(xiàn)有關(guān)豬、鴨、羊、鴿子等呋喃唑酮中毒的事件報(bào)道。呋喃它酮為強(qiáng)致癌性藥物，呋喃唑酮具中等強(qiáng)度致癌性。硝基呋喃類化合物是直接致變劑，它不用附加外源性激活系統(tǒng)就可以引起細(xì)菌的突變。硝基呋喃類藥物在體內(nèi)代謝迅速，代謝第一章 引 言 2 的部分化合物分子與細(xì)胞膜蛋白結(jié)合成為結(jié)合態(tài)，結(jié)合態(tài)可長(zhǎng)期保持穩(wěn)定，從而延緩藥物在體內(nèi)的消除速度。普通的食品加工方法(如燒烤、微波加工、烹調(diào)等)難以使蛋白結(jié)合態(tài)呋喃唑酮?dú)埩粑锎罅拷到?。?dòng)物肝臟為主要的藥物代謝器官，蛋白質(zhì)結(jié)合態(tài)的殘留藥物主要累積在肝臟。歐盟(EU)從 1997 年開始將所有的硝基呋喃類抗生素全部列為違禁藥物。由于對(duì)呋喃唑酮蛋白結(jié)合態(tài)殘留物的安全性產(chǎn)生懷疑，自 1995 年起歐盟全面規(guī)定禁止使用呋喃類抗菌物質(zhì)，在動(dòng)物源性食品中呋喃類殘留物的檢出限為不得檢出。2022 年美國(guó) FDA 公布了禁止在進(jìn)口動(dòng)物源性食品中使用的 11 種藥物名單，其中包括呋喃西林和呋喃唑酮。美國(guó) 規(guī)定：食源性動(dòng)物禁止使用呋喃唑酮和呋喃妥因。歐盟EEC2377/90 規(guī)定動(dòng)物源性食品中不得檢出硝基呋喃 (包括呋喃唑酮)。我國(guó)目前使用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) SN0530－1996 出口肉品中呋喃唑酮?dú)埩袅繖z驗(yàn)方法:液相色譜法，檢測(cè)限量 [45]。但是硝基呋喃類藥物殘留超標(biāo)事件時(shí)有發(fā)生，嚴(yán)重危及動(dòng)物源性食品安全和出口，因此，必須進(jìn)一步強(qiáng)化對(duì)硝基呋喃類藥物的管理。要廣泛宣傳畜禽健康養(yǎng)殖知識(shí)、國(guó)家安全用藥的有關(guān)法律法規(guī)和藥物殘留對(duì)人類健康的危害性，讓廣大養(yǎng)殖者了解使用禁用藥后產(chǎn)生的危害及法律后果，提高養(yǎng)殖者的法律意識(shí)和安全用藥的自覺性。嚴(yán)格按照獸藥管理?xiàng)l例、獸藥生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范GMP 和獸藥經(jīng)營(yíng)管理規(guī)范GSP 的要求規(guī)范生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)行為，加大對(duì)生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)企業(yè)的監(jiān)督管理，嚴(yán)厲查處生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)禁用藥的行為。加強(qiáng)對(duì)飼料生產(chǎn)企業(yè)的監(jiān)控，嚴(yán)禁使用農(nóng)業(yè)部規(guī)定以外的獸藥作為飼料添加劑。（4）加強(qiáng)畜禽養(yǎng)殖的管理。養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)當(dāng)建立養(yǎng)殖檔案，載明飼料、飼料添加劑等投入品和獸藥的來(lái)源、名稱、使用對(duì)象、時(shí)間和用量等有關(guān)情況，禁止使用硝基呋喃等違禁藥物。加大投入，盡快建設(shè)完善我國(guó)動(dòng)物源性食品的獸藥殘留監(jiān)控體系，形成國(guó)家、省、市、縣完整的獸藥殘留檢測(cè)網(wǎng)絡(luò)梯級(jí)結(jié)構(gòu)；加快我國(guó)獸藥殘留監(jiān)控檢測(cè)方法的研究步伐，發(fā)展簡(jiǎn)單快速準(zhǔn)確靈敏的分析技術(shù)；加強(qiáng)對(duì)生產(chǎn)、加工和流通環(huán)節(jié)的監(jiān)管，加大對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)、加工廠和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)等畜禽及產(chǎn)品的抽樣檢測(cè)力度。 樣品的均質(zhì) 取樣時(shí)，通常僅取可食部分，并注意具有代表性。盡量避免將整個(gè)樣品一次均相，引起酶的活性