雙向凝膠電泳ppt課件-展示頁
2025-05-21 06:39本頁面
【正文】 170； Martini OHW, Gould H. J. Enumeration of rabbit reticulocyte ribosomal proteins. J Mol Biol, 1971, 62: 403405； Stegemann H. proteinfraktionierungen in polyacrylamid und die anwendung auf die geische analyse bei pflanzen. Angew Chem, 1970, 82: 640)，使第二向電泳基本上根據(jù)蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量來分離，從而奠定了現(xiàn)代雙向凝膠電泳的基礎，即 IEFSDS PAGE。 隨后， Raymond發(fā)明了聚丙烯酰胺凝膠電泳 (Raymond S, Weintraub L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science, 1959, 30:711)，雙向電泳的支持介質(zhì)逐漸轉(zhuǎn)向聚丙烯酰胺凝膠 (Margolis J, Kenrick KG. Twodimensional resolution of plasma proteins by bination of polyacrylamide disc and gradient gel electrophoresis. Nature, 1969, 221: 10561057)，這即是雙向凝膠電泳 (twodimensional polyacrylamide gel electrophoresis, 2D PAGE)。第五章 雙向凝膠電泳 (2DPAGE) 蛋白質(zhì)組分析的技術路線 雙向凝膠電泳技術的發(fā)展及原理 儀器簡介 樣品制備 技術流程 1. 蛋白質(zhì)組分析的技術路線 ? 要求 ? 流程 ? 技術路線 蛋白質(zhì)組分析的首要要求 將來自于全細胞、組織或生物體中所包含的多達幾千種混合蛋白質(zhì)進行分離、檢測和分析 。 生物學問題的提出 實驗模型的設計 實驗組和對照組樣品的制備 蛋白樣品的 IEF和 PAGE電泳分離 圖像掃描和初步分析 感興趣蛋白點的切取 胰酶對脫色后蛋白質(zhì)的消化 質(zhì)譜的多肽指紋圖、微測序分析 質(zhì)譜結果的生物信息學分析和比對 新蛋白質(zhì)的發(fā)現(xiàn) 其它實驗的進一步驗證 蛋白信息的初步獲得 蛋 白 質(zhì) 組 分 析 流 程 蛋白質(zhì)組研究的基本技術路線 蛋白質(zhì)樣品的制備 雙向電泳 圖像分析 轉(zhuǎn)印至膜上的蛋白 凝膠中的蛋白 溶液中的蛋白 混合肽 蛋白質(zhì)質(zhì)量 N端測序 肽序列質(zhì)譜數(shù)據(jù) 肽指紋圖 數(shù)據(jù)搜索 新的或已知蛋白 蛋白轉(zhuǎn)錄后修飾的鑒定 2. 雙向電泳技術的發(fā)展及原理 ? 雙向凝膠電泳的發(fā)展 ? 雙向凝膠電泳的基本原理 雙向凝膠電泳的發(fā)展 雙向凝膠電泳的思路最早是由 Smithies 和 Poulik提出 (Smithies O, Poulik MD. Twodimensional electrophoresis of serum proteins. Nature, 1956, 177: 1033)，蛋白質(zhì)第一向電泳是根據(jù)其自由溶液遷移率 (freesolution mobility)，在濾紙條上進行；第二向電泳方向與第一向垂直，在淀粉膠上進行。 同年， 2D PAGE在原理上又有了新的發(fā)展，以第一向為蛋白質(zhì)等電聚焦的雙向凝膠電泳技術建立起來，即 IEFPAGE (Dale G, Latner AL. Isoelectric focusing of serum proteins in acrylamide gels followed by electrophoresis. Clin Chim Acta, 1969, 24: 6168； Macko V, Stegemann H. Mapping of potato proteins by bined elctrofocusing and electrophoresis identification of varieties. Hoppeseyler’s Z Physiol. Chem, 1969, 350: 917919)。 1975年， O’Farrell、 Klose和 Scheele分別對雙向凝膠電泳做進一步的優(yōu)化，建立了高分辨率的雙向凝膠電泳 (O’Farrell PH. High resolution twodimensional electrophoresis of proteins. J Biol Chem, 1975, 250:40074021；Klose J. protein mapping by bined isoelectric focusing and electrophoresis of mouse tissues. A novel approach to testing for induced point mutations in mammals. Humangeik, 1975, 26:231243； Scheele GA. Twodimensional gel analysis of soluble proteins. J Biol Chem, 1975, 250:53755385)。 雙向凝膠電泳的基本原理 先將蛋白質(zhì)根據(jù)其等電點在 pH 梯度膠內(nèi)進行等電聚焦，然后按照它們的
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