蛋白質(zhì)組研究技術(shù)ppt課件-展示頁(yè)
2025-05-12 06:01本頁(yè)面
【正文】 目前還 不能達(dá)到工業(yè)需求的高通量 翻譯后修飾 無(wú)法研究 研究翻譯后修飾的唯一方法是研究蛋白質(zhì)本身 動(dòng)態(tài)范圍 5個(gè)數(shù)量級(jí) 712個(gè)數(shù)量級(jí) DNA分析（ cDNA微陣列）與蛋白質(zhì)分析（ 2DE與質(zhì)譜）方法的比較 二、蛋白質(zhì)研究技術(shù)的發(fā)展 ? 雙向電泳技術(shù)： 1975年， O’Farrel建立的；是目前唯一能將數(shù)千種 蛋白質(zhì)同時(shí)分離與展示 的分離技術(shù)，一般能分離1000 – 3000個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn) ? 圖像分析與大規(guī)模數(shù)據(jù)處理軟件 ? 兩種軟電離質(zhì)譜技術(shù)－ 基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（ matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry, MALDITOFMS）與 電噴霧電離質(zhì)譜（ electrospray ionization mass spectrometry, ESIMS）：可精確測(cè)定生物大分子的 相對(duì)分子質(zhì)量 及 多肽序列 ，使得 微量快速的蛋白質(zhì)鑒定 得以實(shí)現(xiàn) 雙向電泳技術(shù)、計(jì)算機(jī)圖像分析與大規(guī)模數(shù)據(jù)處理技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù) 蛋白質(zhì)組研究的三大基本支撐技術(shù)。第三章 蛋白質(zhì)組研究方法 Chapter 3 Research Methods in Proteomics 主 要 內(nèi) 容 ? 蛋白質(zhì)研究方法的概述 ? 大規(guī)模的蛋白質(zhì)分離技術(shù) ? 高通量蛋白質(zhì)鑒定技術(shù) 第一節(jié) 概述 一、蛋白質(zhì)組的研究遠(yuǎn)比基因組的研究要復(fù)雜的多 ? 蛋白質(zhì)的數(shù)目遠(yuǎn)大于基因的數(shù)目： 基因的拼接和翻譯后修飾 ? 蛋白質(zhì)是動(dòng)態(tài) /基因是相對(duì)靜態(tài)的 ? 氨基酸種類遠(yuǎn)多于核苷酸種類 ? 技術(shù)手段上： 基因研究有 PCR、 DNA自動(dòng)測(cè)序技術(shù)、 DNA微陣列技術(shù)等；蛋白質(zhì)沒(méi)有相匹配的技術(shù) DNA 蛋白質(zhì) 檢測(cè)水平 /靈敏度 可用 PCR技術(shù)擴(kuò)增 檢測(cè)限約為 30個(gè)拷貝 /樣本 無(wú)法被擴(kuò)增 檢測(cè)方法 高度特異 DNA與其互補(bǔ)序列（ DNA/RNA）的雜交能力使得 DNA很容易固相化在靶上并用熒光探針檢測(cè)。高密度陣列檢測(cè)專用的掃描儀已經(jīng)出現(xiàn) 非特異 蛋白質(zhì)可以用非特異的方法如蛋白染色或較特異的方法如抗體進(jìn)行檢測(cè) 分子的穩(wěn)定性 DNA是 非常穩(wěn)定 的，即使在提高溫度的情況下也不丟失生物活性 蛋白質(zhì)在 變性情況下將喪失天然功能 ，需要格外小心保持其天然構(gòu)象 重復(fù)性 重復(fù)性好 將 DNA固相化在表面已經(jīng)是成熟的技術(shù)，加之 DNA固有的穩(wěn)定性，方法的重復(fù)性較好 重復(fù)性不好 由于蛋白質(zhì)分子的穩(wěn)定性不好，方法的重復(fù)性需格外關(guān)注 消耗 初始的投入是較大的（微陣列、掃描儀、共聚焦顯微鏡），但短期內(nèi)得到的數(shù)據(jù)量相當(dāng)大 目前的蛋白質(zhì)分析方法依賴 昂貴 的儀器設(shè)備（質(zhì)譜儀、 2DE裝置） 專業(yè)化 方法已相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化 蛋白質(zhì)的分析 較困難 。 三、蛋白質(zhì)組研究步驟 ? 2D電泳 ? 高效柱層析分離蛋白質(zhì) ? 氨基酸組成分析、 C端或 N端氨基酸序列分析及 MS鑒定所分離的蛋白質(zhì) ? 生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)鑒定結(jié)果進(jìn)行存儲(chǔ)、處理、對(duì)比和分析 蛋白樣品的 IEF和 PAGE電泳分離 生物學(xué)問(wèn)題的提出 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷脑O(shè)計(jì) 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組樣品的制備 圖像掃描和初步分析 感興趣蛋白點(diǎn)的切取 胰酶對(duì)脫色后蛋白質(zhì)的消化 質(zhì)譜的多肽指紋圖、微測(cè)序分析 質(zhì)譜結(jié)果的生物信息學(xué)分析和比對(duì) 新蛋白質(zhì)的發(fā)現(xiàn) 其它實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步驗(yàn)證 蛋白信息的初步獲得 蛋白質(zhì)組研究策略 蛋白質(zhì)組研究的基本技術(shù)路線 凝膠中的蛋白膠上原位酶切 蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù) 蛋白質(zhì)樣品的制備（細(xì)胞、組織、體液） 雙向電泳
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