人工染色體載體ppt課件-展示頁
2025-05-11 00:10本頁面
【正文】 ④ 構建的 cosmid克隆載體較小，因此能承載比較大的外源 DNA片段。 但由于 cosmid克隆載體并不含有 λ噬菌體的全部必要基因，因此它不能通過溶菌周期，無法形成子代噬菌體顆粒。 cosmid克隆載體在克隆了合適長度的外源DNA，并在體外包裝成噬菌體顆粒之后，可以高效地轉(zhuǎn)導對 λ噬菌體敏感的大腸桿菌寄主細胞。 ③ 具有 λ噬菌體的特性。 cosmid克隆載體通常也具抗菌素抗性基因，作為重組體分子表型選擇標記。 ② cosmid克隆載體具有質(zhì)粒的性質(zhì)。 克隆能力為 31～45kb，而且能夠被包裝成為具有感染性能的噬菌體顆粒。 cosmid載體 pHC79 2022/5/25 11 pBR322質(zhì)粒 (p43) 用 λ噬菌體基因組的 cro— rⅡ 的 BglⅡ 限制片段，取代 pBR322質(zhì)粒 DNA的位于 1 459～ 1 666bp之間的 Sau3A片段，產(chǎn)生出具有 BglⅡ 單切割位點 的重組體分子。 二、 構建 cosmid克隆載體的策略 根據(jù) λ噬菌體克隆載體和質(zhì)粒克隆載體兩者的這些性質(zhì)，取長去短，設計由 質(zhì)粒 和含有 cos位點 的這種 λDNA片段組裝成一類新的克隆載體，即 cosmid克隆載體 。有的粘粒載體含有 2個 cos位點。 ②抗性標記 Ampr ?？寺〉淖畲? DNA 片段可達45kb。 ? cos序列是 l噬菌體DNA 中將 DNA包裝到噬菌體顆粒中所需的 DNA序列。 pHC79 6400 bp Tcr l fragment cos ori Apr PstI BamHI SalI 2022/5/25 6 考斯質(zhì)粒 （ cosmid） = 質(zhì)粒 + cos序列。 2022/5/25 3 ?目前常用的人造染色體載體包括： 細菌人工染色體載體（ BAC） 酵母人工染色體載體（ YAC） 黏粒載體（ cosmid ） P1人工染色體載體（ PAC） 2022/5/25 4 pHC79 6400 bp Tcr l fragment cos ori Apr PstI BamHI SalI ? 1978年 發(fā)明構建 kb的 lDNA片段 + pBR322片段裝載范圍為 31 45 kb。2022/5/25 1 2022/5/25 2 利用染色體的復制元件來驅(qū)動外源 DNA片段復制的載體稱為 人工染色體載體 。 人工染色體載體 : 模擬染色體的復制方式，因此都能裝載大片段的 DNA片段。 第一節(jié) 黏粒 （ cosmid） 載體 2022/5/25 5 第一節(jié) 黏粒 （ cosmid） 載體 黏?？寺≥d體（ 柯斯質(zhì)粒載體 ）實際上是質(zhì)粒的衍生物，是由英文“ cos sitecarrying plasmid”縮寫而成的，其原意是指 帶cos位點的質(zhì)粒。 pHC79 6400 bp Tcr l fragment cos ori Apr PstI BamHI SalI ?它是用正常的質(zhì)粒同 λ噬菌體的 cos位點構成。 2022/5/25 7 黏粒 它的大小一般 57kb 左右，用來克隆大片段 DNA。 ①質(zhì)粒復制起點（ colE1） 象質(zhì)粒一樣轉(zhuǎn)化和增殖。 ③ cos位點。 pHC79 6400 bp Tcr l fragment cos ori Apr PstI BamHI SalI 一、黏粒的結構特征和用途 2022/5/25 8 一、黏粒的結構特征和用途 ? 能像 lDNA那樣進行體外包裝，并高效轉(zhuǎn)染受體細胞； ? 能像質(zhì)粒那樣在受體細胞中自主復制； ? 重組操作簡便，篩選容易； ? 裝載量大 （ 45 kb） 且克隆片段具有一定的大小范圍； ? 不能體內(nèi)包裝，不裂解受體細胞。 由 λDNA片段和 pBR322
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1