核酸分離和純化ppt課件-展示頁
2025-05-10 01:09本頁面
【正文】 鑒定核酸濃度和純度？ ? 核酸的保存方法有哪些？ 3 前言 核酸 （ nucleic acid） 是以核苷酸為基本組成單位的生物信息大分子。是遺傳信息的攜帶者，是基因表達(dá)的物質(zhì)基礎(chǔ)。 ?核外也有少量 DNA，如線粒體 DNA，葉綠體DNA。 ? RNA ?存在于細(xì)胞質(zhì)中，如 mRNA, rRNA, tRNA等。 5 主要內(nèi)容 1. 核酸分離與純化的原則及要求 2. 核酸制備的基本步驟 3. 核酸的鑒定和保存 4. 核酸提取方法簡介 6 1. 核酸分離與純化的原則及要求 核酸分離與純化的一般原則 (1) 保持核酸分子 一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性 ，是核酸結(jié)構(gòu)和功能研究的最基本要求。 7 核酸分離與純化的要求 (1) 為保證核酸的 完整性， （防止降解 ），在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意： ① 盡量簡化步驟，縮短提取時(shí)間，減少各種有害因素對(duì)核酸的破壞。 化學(xué)因素？ 生物因素？ 物理因素？ 8 ③ 防止核酸的生物降解（細(xì)胞內(nèi)或外的各種核酸酶水解） 。操作溫度為 0~4℃ 。 ? RNA酶 分布廣泛，極易污染樣品，而且耐高溫、耐酸堿、不易失活，生物降解是 RNA提取過程中的主要危害因素。 9 ④ 減少物理因素對(duì)核酸的降解，主要是機(jī)械剪切力，其次是高溫。 ? 高溫，如長時(shí)間的煮沸。 11 2. 核酸制備的基本步驟 破碎細(xì)胞 提取 純化 －內(nèi)容物釋放 ，純化并去除雜質(zhì) 12 破碎細(xì)胞 (1)玻璃勻漿器勻漿 (2)液氮研磨法 ? 多用于堅(jiān)硬植物材料，研磨時(shí)常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨劑，以提高研磨效果 肝、腎等 冰上 少量 13 (3)高速組織搗碎機(jī)搗碎 (4)超聲波處理法 (5)化學(xué)處理法 (SDS、吐溫 80（油酸酯）等） (6)生化法（溶菌酶、纖維素酶等） 14 核酸分離，去除蛋白 核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)合力主要是正負(fù)靜電吸力 (核酸與堿性蛋白的結(jié)合 )、氫鍵和非極性的范德華力。 15 （ 1） 加入 SDS SDS除有破膜和抑制核酸酶的作用外，還具有使核酸從蛋白質(zhì)上游離出來的功能； （ 2） 加入濃鹽溶液（如 NaCl） 核酸 蛋白質(zhì)加入 NaCl后，破壞靜電吸力，使氫鍵破壞，核蛋白解聚； 16 （ 3）酚 /氯仿抽提 ? 酚／氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果，并對(duì)核酸酶有抑制作用。 ? 在酚 /氯仿抽提核酸提取液時(shí)，需要振搖， 為防止起泡和促使水相與有機(jī)相的分離 ，再加上一定量的異戊醇（ 酚：氯：異戊醇 =25： 24： 1）。 變色的酚不能用于核酸抽提實(shí)驗(yàn) ，因?yàn)檠趸锟善茐暮怂岬牧姿岫ユI。 使用酚時(shí)應(yīng)注意 18 沉淀核酸 ? 重新調(diào)整核酸的濃度，起到 濃縮核酸 的作用； ? 去除 溶液中某些鹽離子與 雜質(zhì) ； ? 改變核酸的溶解緩沖液。
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