層析分離純化技術(shù)ppt課件-展示頁
2025-01-30 19:26本頁面
【正文】 of proteins based on reversible interactions between a protein and a specific ligand coupled to the stationary phase Affinity Chromatography Principle ? Profinity IMAC——純化 Histagged Protein ? Chelex 100——純化 DNA， PCR樣品制備 ? AffiGel Protein A——純化單克隆抗體 ? Dye AffiGel Blue (DEAE or CM) ——純化單抗，分離 HSA ? AffiGel 肝素凝膠 ——多種蛋白，如凝結(jié)因子、蛋白酶、核酸酶、脂酶 ? AffiGel Polymixin——去除內(nèi)毒素（熱原） ? AffiGel 硼膠 ——分離核苷酸、核苷、兒茶酚胺、糖類等小分子 親和層析 產(chǎn)品與應(yīng)用 Profinity IMAC Resins 固定化金屬螯合層析： Immobilized Metal Affinity Chromatography （ IMAC） ? 基于純化重組組氨酸標記蛋白設(shè)計，專門純化 Histagged Protein 螯合帶電離子，如 Zn2+,Ni2+,Cu2+, 現(xiàn)有的產(chǎn)品為螯合 Ni2+的介質(zhì) ? UNOsphere 技術(shù) 更好的流動特性，在高流速下載量，目的蛋白得率和純度不會受到影響。 8 0 0 197。 CS u rfa c e a r ea ( m2/ g ) 4 2 4 9 m2/g 2 2 2 4 m2/gP o re size (197。 離子交換層析 離子交換層析操作參數(shù)選擇 pI＝ + pH 10 2 離子交換層析 緩沖液與 pH pI＝ 陽離子交換 陰離子交換 堿性蛋白，采用陽離子交換 酸性蛋白，采用陰離子交換 蛋白質(zhì)凈電荷 蛋白質(zhì)穩(wěn)定性范圍 Columns Media BioScale Q MacroPrep high Q BioScale DEAE MacroPrep DEAE BioScale S MacroPrep high S BioScale CM MacroPrep CM MacroPrep 25 Q MacroPrep 25 DEAE MacroPrep 25 S UNO Q UNOsphere Q UNO S UNOsphere S 離子交換層析 離子交換層析產(chǎn)品 50um 25um 120um 80um 10um ? 更高的選擇性和 分辨率 ? 10% 穿透 載量 : – Unosphere Q: 150 mg/ml BSA 600 cm/hr – Unosphere S: 30 mg/ml BIgG 600 cm/hr ? 高 流速 ，低反壓 －操作壓力 : 2 bar 1200 cm/hr with 20 cm ? 更高的堿穩(wěn)定性 – 短期 : M NaOH RT for 1 week – 長期 : Storage in M NaOH RT for 1 year ? 生產(chǎn)效率大大提高 離子交換層析 UNOsphere Q/S性能參數(shù) Ca 2 + PO 3 4 Crystal Formation Crystal Drying And Granulation Sintering At High T emperature 羥基磷灰石（ CHT） 合成 ? Ca10(PO4)6(OH)2 ? 5 個帶正電荷的 Ca離子對（ C位點） ? 2 個磷酸三價離子，每個含有帶 6個負電荷的氧原子（ P位點） ? 2 個羥基 ? 于其他層析介質(zhì)不同， CHT的骨架是化學(xué)反應(yīng)的表面 CHT陶瓷羥基磷灰石晶體結(jié)構(gòu) 羥基磷灰石（ CHT） T y pe I T y pe I IF u n cti o n a l g ro u p Ca 10 (P O 4 ) 6 (OH ) 2 Ca 10 (P O 4 ) 6 (OH ) 2S i n ter i n g Te m p e ra t u re 4 0 0 176。一般的，隨離子強度增加，蛋白質(zhì)保留值減小。 S, CM, DEAE, AG174。 S, MacroPrep174。這是樣品中的未結(jié)合物質(zhì) Vo Ve Vt 蛋白質(zhì)含量 (A280), 由UV檢測器讀出， y軸 基線 洗脫峰，有些可以很好的分離，有些分得不是很好，有部分交叉 有時這里也顯示梯度濃度等檢測值 時間或體積， x軸 DuoFLow 軟件系統(tǒng) 非常直觀，易學(xué) 簡單明快， 4個步驟進入操作： Browser? Setup ? Protocol ? Run 觀察樣品情況 ,調(diào)節(jié)色普圖和峰高度 or Go Do Something Else! 快速啟動功能： 2 次擊鍵進入操作 Browser? Run 觀察樣品情況 ,調(diào)節(jié)色普圖和峰高度 or Go Do Something Else! DuoFLow 軟件系統(tǒng) Manual Screen DuoFLow 軟件系統(tǒng) Browser – Enter User and Method Name DuoFLow 軟件系統(tǒng) Setup –select hardware DuoFLow 軟件系統(tǒng) Protocol – enter method DuoFLow 軟件系統(tǒng) Post Run Options Activity DuoFLow 軟件系統(tǒng) Post Run Options–Peak Tagging DuoFLow 軟件系統(tǒng) Post Run Options – TRACE COMPARE 層析圖比較 單一柱子單一程序走不同樣品 單一樣品和單一程序走不同柱子 同一樣品和柱子走不同程序 DuoFLow 軟件系統(tǒng) DuoFLow 軟件系統(tǒng) DuoFLow 軟件系統(tǒng) 純化平臺的硬件結(jié)構(gòu) —— 層析介質(zhì)與層析柱，原理與技術(shù) 層析介質(zhì) ?離子交換層析介質(zhì) Unosphere Q， S MacroPrep High Q,High S,DEAE,CM ?親和層析 Profinity IMAC金屬螯合介質(zhì) Profinity Epoxide環(huán)氧親和介質(zhì) AffiGel Protein A, AffiPrep Protein A AffiGel藍膠， DEAE藍膠， CM藍膠 AffiPrep多粘菌素介質(zhì) AffiGel硼膠 AffiGel配體固定化活化介質(zhì) ?凝
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