金牌原創(chuàng)]第七章層析分離技術(shù)-展示頁
2025-01-27 20:05本頁面
【正文】 即在鹽析、離子交換或親和層析之后用。 常用的疏水性配基主要有苯基、短鏈烷基（ C3C8）、烷氨基、聚乙二醇和聚醚等。這部分疏水基團可與親水性固定相表面偶聯(lián)的短鏈烷基、苯基等弱疏水基會發(fā)生疏水性相互作用，被固定相（疏水性吸附劑）所吸附。 （ 1）主要用于脫鹽 （ 2）類分離 （ 3）分級分離 （ 4）生物大分子分子量的測定 （二）凝膠柱層析的特點與應(yīng)用 第六節(jié) 疏水柱層析 一、疏水層析的原理 ? 親水性蛋白質(zhì)（酶）表面均含有一定量的疏水性基團。 二、凝膠的種類 三、凝膠柱層析的操作與應(yīng)用 （一）凝膠柱層析的操作特點 凝膠柱層析優(yōu)點：（ 1）分離條件溫和，因此不易引起生物樣品的變性失活；（ 2）每次分離操作之后，層析劑無需再生就可重復(fù)利用；（ 3）工作范圍廣，分離的分子質(zhì)量范圍可從幾百到數(shù)百萬；（ 4）設(shè)備簡單，分離機理簡單，易于操作；（ 5）樣品回收率高，幾乎可達 100%。 固定相（凝膠）是一種不帶電荷的具有三維空間的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，凝膠的每個顆粒的細微結(jié)構(gòu)就如一個篩子，小的分子可以進入凝膠網(wǎng)孔，而大的分子則排阻于凝膠顆粒之外，因而具分子篩的性質(zhì)。 離子交換劑的處理和保存 處理：干粉狀的離子交換劑首先要進行膨化，再用酸堿分別浸泡 離子交換樹脂的選擇依據(jù) 三、離子交換柱層析的操作與應(yīng)用 （一）離子交換柱層析的操作 1．層析柱 2．平衡緩沖液 3．上樣 4．洗脫緩沖液 5．洗脫速度 6．樣品的濃縮、脫鹽 （二） 離子交換柱層析的應(yīng)用 第五節(jié) 凝膠柱層析 一、凝膠層析的原理 凝膠層析又稱分子排阻層析、分子篩層析或凝膠過濾。通常所說的離子交換劑的交換容量是指離子交換劑所能提供交換離子的總量，又稱為總交換容量，它只和離子交換劑本身的性質(zhì)有關(guān)。 （一）離子交換劑的基質(zhì) （二）離子交換劑的電荷基團 根據(jù)與基質(zhì)共價結(jié)合的電荷基團的性質(zhì)，可以將離子交換劑分為陽離子交換劑和陰離子交換劑。 離子交換層析是依據(jù)各種離子或離子化合物與離子交換劑的結(jié)合力不同而進行分離純化的。平衡離子是結(jié)合于電荷基團上的相反離子，它能與溶液中其他的離子基團發(fā)生可逆的交換反應(yīng)。著流速過快，柱中交換來不及達到平衡，因而影響分離效果。 整個操作過程必須注意不使吸附柱表面的溶液流干，即吸附柱上端要保持一層溶劑。 三、吸附柱層析的基本操作與應(yīng)用 洗 脫 在裝好吸附劑的色譜柱中緩緩加入洗脫劑，進行梯度洗脫，各組分先后被洗出。 （ 2）干法上樣 多數(shù)情況下，被分離物質(zhì)難溶于最初使用的洗脫劑，這時可選用一種對其溶解度大而且沸點低的溶劑，取盡可能少的溶劑將其溶解。當(dāng)洗脫劑剛好覆蓋吸附劑平面時，關(guān)緊下口活塞。 （ 2）濕法裝柱 將吸附劑加入合適量的色譜最初用洗脫劑調(diào)成稀糊狀，先把放好棉花、砂子的色譜柱下口打開，然后徐徐將制好的糊漿灌人柱子。 ? 吸附劑的種類很多，而對吸附劑的選擇尚無固定的法則，一般需通過小樣實驗來確定。 （三）依分離機理分 第二節(jié) 層析分離的基本操作技術(shù) 一、 柱層析基本操作技術(shù) （一）柱層析的基本裝置 固定相 流動相 收集系統(tǒng) 檢測系統(tǒng) 蠕動泵 （二）柱層析系統(tǒng)的基本操作技術(shù) 、合并收集 二、紙層析基本操作技術(shù) ? （一）濾紙 ? （二）展開劑 ? （ 三）操作方法 ? （四）在抗生素中的應(yīng)用 三、薄層層析基本操作技術(shù) （一）基本原理 （二）吸附劑和展開劑的選擇 （三）基本操作 、展層與顯色 Rf的主要因素 第三節(jié) 吸附柱層 ? 一、吸附層析的原理與特點 基本原理同吸附薄層色譜法。 （三）層析的基本概念 ? ? ? （或比移值） ? （或分離度） ? ? （或交換容量） 二、層析分離技術(shù)的分類 （一）依操作形式分 分為紙層析、薄層層析和柱層析。 ? （ 4）設(shè)備簡單，操作方便。 ? （ 2）應(yīng)用范圍廣。第七章 層析分離技術(shù) 第一節(jié) 層析的基本原理與分類 ? 一、層析分離的基本原理與特點 ? （一）基本原理 ? 層析分離是一種物理的分離方法，利用多組分混合物中各組分物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分以不同的程度分布在兩個相中。 ? （二）層析分離具有如下基本特點 ? 優(yōu)點 ：
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