基因診斷ppt課件(2)-展示頁(yè)
2025-05-07 22:35本頁(yè)面
【正文】 測(cè)定是進(jìn)行基因突變檢測(cè)的最直接、最準(zhǔn)確的方法，可以確定突變的部位，突變的性質(zhì)。 斑點(diǎn)雜交（ Dot blot） 可用基因組中特定基因及其表達(dá)的定性及定量分析，方法簡(jiǎn)單、快速靈敏、樣品用量少；其缺點(diǎn)是不能鑒定所測(cè)基因的分子量，特異性不高，有一定比例的假陽(yáng)性。 固相雜交分類 Southern 印記雜交 Northern 印記雜交 斑點(diǎn)雜交 原位雜交 Southern blot 是最經(jīng)典的基因分析方法，不但能檢出特異的 DNA片段，而且能進(jìn)行定量和測(cè)定分子量，可用于基因的酶切圖譜分析、基因突變分析等。 固相雜交是將參加反應(yīng)的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應(yīng)核酸游離在溶液中。因此應(yīng)用已知堿基序列的單鏈核苷酸片段作為探針，就可檢測(cè)樣本中是否存在與其互補(bǔ)的同源核苷酸序列。第九章 基因診斷 第一節(jié) 基因診斷的概念 及常用技術(shù) 基因診斷 — 利用分子生物學(xué)技術(shù)，從 DNA/RNA水平檢測(cè)基因的存在 ,分析基因的結(jié)構(gòu)變異和表達(dá)狀態(tài)，從而對(duì)疾病作出診斷。 一、基本概念 二、基因診斷常用方法 ㈠ 核酸分子雜交 ㈡ PCR ㈢ DNA序列測(cè)定 ㈣ DNA芯片技術(shù) (一 ) 核酸雜交 基本原理 核酸變性和復(fù)性理論 即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開，而在條件恢復(fù)后又可依堿基配對(duì)規(guī)律形成雙鏈結(jié)構(gòu)。 probe probe 核酸雜交的關(guān)鍵要素 probe DNA target DNA signal detection 核酸雜交方法分類 按作用環(huán)境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。 液相雜交所參加反應(yīng)的兩條核酸鏈都游離在溶液中。 Northern雜交 用于 RNA的檢測(cè)，能對(duì)組織細(xì)胞中總 RNA或 mRNA進(jìn)行定性和定量分析。 原位雜交 （ Colony in situ hybridization） 可查明染色體中特定基因的位置，用于染色體疾病的診斷；原位雜交的結(jié)果是顯示有關(guān)核酸序列的空間位置情況，因此可檢出含核酸序列的具體細(xì)胞，細(xì)胞的具體定位，數(shù)目和類型，可檢出基因和基因產(chǎn)物的亞細(xì)胞定位。 （四 ） DNA芯片技術(shù) 應(yīng)用 DNA芯片，可以檢測(cè)基因的結(jié)構(gòu)及其突變多態(tài)性，對(duì)基因表達(dá)的情況進(jìn)行分析。 有效治療難；通過(guò)基因診斷進(jìn)行攜帶者篩查，產(chǎn)前早期診斷，降低發(fā)病率。 患者多在成年以前死亡 MstⅡ 酶切位點(diǎn) (CCTNAGG) 5180。 正?；? 5180。 突變基因 （一）鐮狀紅細(xì)胞貧血分子機(jī)制 5 6 7 Pro Glu Glu— CCT GAG GAG 5 6 7 Pro Ala Glu— CCT GTG GAG （二）鐮狀細(xì)胞貧血的基因診斷方法 限制性內(nèi)切酶 /Southern blot 采集制備血液 DNA→ 內(nèi)切酶 MstⅡ 消化 → 電泳 → 轉(zhuǎn)膜 → 32P標(biāo)記的 β 珠蛋白 cDNA雜交 →放射自顯影 + ﹣ 正常人 突變攜帶著 患者 鐮狀紅細(xì)胞貧血患者基因組的限制性酶切分析 PCR/限制性內(nèi)切酶 設(shè)計(jì)引物 → PCR擴(kuò)增 → 產(chǎn)物進(jìn)行 限制性內(nèi)切酶酶切 → 電泳 → EB染色 → 直接觀察 例： 引物 1： 5’ G
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