【正文】 ，不斷進(jìn)行分裂增殖，在創(chuàng)傷表面形成一種由相對(duì)沒(méi)有分化的活的的薄壁細(xì)胞團(tuán)組成的新生組織，即愈傷組織。（細(xì)胞排列疏松、無(wú)規(guī)則）脫分化：已經(jīng)高度分化的植物細(xì)胞，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)重新恢復(fù)了分裂能力，產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程，又稱去分化。（1） 概念： 植物組織培養(yǎng)就是在無(wú)菌和人工控制的條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、生芽，最終形成完整的植株。③ 長(zhǎng)期培養(yǎng)中，細(xì)胞全能性表達(dá)能力下降的原因：1）遺傳物質(zhì)不可逆改變：染色體畸變、細(xì)胞核變異或非整倍體產(chǎn)生，且其結(jié)果不可逆；2）生長(zhǎng)發(fā)育條件變化：細(xì)胞或組織中激素平衡被打破，或細(xì)胞對(duì)外源生長(zhǎng)物質(zhì)的敏感性發(fā)生改變；3）由于其他原因產(chǎn)生了缺乏成胚性的細(xì)胞系。② 不同植物或同種植物不同基因型個(gè)體的細(xì)胞全能性有差異：由于不同種類植物或同種植物的不同基因型個(gè)體之間遺傳性的差異，細(xì)胞全能性的表達(dá)程度大不相同。即植物體的每個(gè)活細(xì)胞，即使是已經(jīng)高度成熟和分化的細(xì)胞，都保持了恢復(fù)到分生狀態(tài)的能力，都具有遺傳上的全能性。 原因：從理論上講，每個(gè)細(xì)胞都包含該物種的全部遺傳物質(zhì)（全部基因），所以每個(gè)活細(xì)胞都應(yīng)具有全能性 。從理論上說(shuō)，由于細(xì)胞核具有基因組合全套遺傳信息，生物的體細(xì)胞有潛力直接發(fā)育成胚胎和形成與核供體完全相同的個(gè)體克隆。在分子水平上，基因克隆是指某種目的基因的復(fù)制、分離的過(guò)程；在細(xì)胞水平上，細(xì)胞克隆技術(shù)在利用雜交瘤制備單克隆抗體的技術(shù)中得到應(yīng)用；在個(gè)體水平上，克隆技術(shù)就是一種通過(guò)單個(gè)細(xì)胞，特別是來(lái)自特定活體的單個(gè)體細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖從而產(chǎn)生新個(gè)體的過(guò)程或技術(shù)。 克隆就是指無(wú)性繁殖系。 無(wú)限繁殖產(chǎn)生的個(gè)體保持了親本的遺傳性狀，一次產(chǎn)生后代的數(shù)量可以很大，可以迅速擴(kuò)大其種群的數(shù)量。第二章 克隆技術(shù)一、什么是克隆繁殖的方式：（1）有性繁殖：經(jīng)過(guò)異性生殖細(xì)胞的結(jié)合，產(chǎn)生合子，再由合子發(fā)育成下一代個(gè)體的繁殖方式。DNA是遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)過(guò)程、DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的確立和遺傳信息傳遞方式的認(rèn)定是基因工程誕生的理論基礎(chǔ)，而限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和質(zhì)粒載體的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用，又為基因工程的創(chuàng)建提供了技術(shù)上的保障。三：本章總結(jié)：基因工程就是把一種生物的基因轉(zhuǎn)入另一種生物體中，使其產(chǎn)生我們需要的基因產(chǎn)物，或者讓它獲得新的遺傳性狀。 采用選擇性培養(yǎng)基篩選。如用質(zhì)粒作載體，宿主細(xì)胞應(yīng)選擇大腸桿菌，用氯化鈣處理大腸桿菌，增加大腸桿菌細(xì)胞壁的通透性，使含有目的基因的重組質(zhì)粒進(jìn)入大腸桿菌宿主細(xì)胞。將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑿纬傻闹亟MDNA分子轉(zhuǎn)移到合適的受體細(xì)胞中。如胰島素基因 或用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增目的基因 ②目的基因的序列未知：建立一個(gè)包括目的基因在內(nèi)的基因文庫(kù)，從基因文庫(kù)中找到目的基因形成重組DNA分子： 就是將目的基因與載體DNA連接在一起。（1）目的基因：是指能編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。 為了實(shí)現(xiàn)基因工程的母版，通常要有多種工具酶、目的基因、載體和宿主細(xì)胞等基本要素，并按照一定的程序進(jìn)行操作：目的基因的獲得、重組DNA的形成、重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞（宿主細(xì)胞），篩選含有目的基因的受體細(xì)胞、基因表達(dá)。最常用的質(zhì)粒是大腸桿菌的質(zhì)粒。3）具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（3）“分子運(yùn)輸車”——載體——質(zhì)粒① 載體具備的條件：1）能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。（2）“分子縫合針”——DNA連接酶① 作用：將具有末端堿基互補(bǔ)的2個(gè)DNA片段連接在一起（縫合磷酸二酯鍵）形成的DNA分子稱為重組DNA分子。③ 結(jié)果：能將DNA分子切割成許多不同的片段。② 功能：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并能切割（使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)），因此具有專一性。（3）基因工程誕生的理論基礎(chǔ)： DNA是遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)過(guò)程、DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的確立、遺傳信息傳遞方式的認(rèn)定。基因工程的核心是構(gòu)建重組DNA分子。.. . . ..第一章 基因工程一、工具酶的發(fā)現(xiàn)和基因工程的誕生基因工程的概念：（1）廣義的遺傳工程：泛指把一種生物的遺傳物質(zhì)（細(xì)胞核、染色體脫氧核糖核酸等）移到另一種生物的細(xì)胞中去，并使這種遺傳物質(zhì)所帶的遺傳信息在受體細(xì)胞中表達(dá)。（2）基因工程： 就是把一種生物的基因轉(zhuǎn)入另一種生物體中，使其產(chǎn)生我們需要的基因產(chǎn)物，或者讓它獲得新的遺傳性狀。由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫做DNA重組技術(shù)?；蚬こ痰幕竟ぞ撸?）“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）① 來(lái)源：主要是從原核生物中分離純化出來(lái)的。 例如：某種限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別的序列是GAATTC,能在G和A之間切割DNA，如下圖所示。備注：不同DNA分子用同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割形成的黏性末端都相同；同一個(gè)DNA分子用不同限制性核酸內(nèi)切酶切割，產(chǎn)生的黏性末端一般不相同。 因此，DNA連接酶具有縫合DNA片段的作用，可以將外源基因和載體DNA連接在一起。2）具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入。② 最常用的載體——質(zhì)粒：質(zhì)粒在細(xì)菌中以獨(dú)立于擬核之外的方式存在，是一種特殊的遺傳物質(zhì)，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。③ 其它載體： 噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒二、基因工程的原理和技術(shù)基因工程的基本原理： 是讓人們感興趣的基因（即目的基因）在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定和高效地表達(dá)。2：目的基因的獲得：即獲得我們所需要的基因，如人的胰島素基因。（2）獲得目的基因的兩種方法： ①目的基因的序列已知：用化學(xué)方法合成目的基因。 通常是用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割目的基因和載體DNA（如質(zhì)粒），就會(huì)在目的基因和載體DNA的兩端形成相同的黏性末端，然后用DNA連接酶將目的基因和載體DNA連接在一起，形成重組DNA分子。常用的受體細(xì)胞有大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。篩選含有目的基因的受體細(xì)胞： 并不是所有細(xì)胞都接納了重組DNA分子，因此需要篩選含有目的基因的受體細(xì)胞。目的基因的表達(dá)：目的基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)，能產(chǎn)生人們需要的功能物質(zhì)?；蚬こ痰暮诵氖菢?gòu)建重組DNA分子?；蚬こ痰牟僮饕徊桨ǎ耗康幕虻墨@得、重組DNA的形成、重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞（也稱宿主細(xì)胞）、篩選含有目的基因的受體細(xì)胞核母妃基因表達(dá)。（2）無(wú)性繁殖：不經(jīng)過(guò)異性生殖細(xì)胞的結(jié)合，直接由母體產(chǎn)生下一代個(gè)體的繁殖方式。無(wú)性繁殖系：個(gè)體通過(guò)無(wú)性繁殖可連續(xù)傳代并形成群體，這樣的群體稱為無(wú)性繁殖系?？寺〖夹g(shù)： 是指才眾多的基因或細(xì)胞群體中通過(guò)無(wú)性繁殖和選擇獲得目的基因或特定類型細(xì)胞的操作技術(shù)?；蚩寺『图?xì)胞克隆是現(xiàn)代生物技術(shù)中的關(guān)鍵技術(shù)。二、植物的克?。杭?xì)胞全能性（1）植物細(xì)胞全能性：指植物體的每個(gè)活細(xì)胞都具有遺傳上的全能性，因而都具有發(fā)育成完整植株的潛能。（2）植物細(xì)胞全能性的體現(xiàn)：全能性表達(dá)的難易程度：受精卵＞生殖細(xì)胞＞干細(xì)胞＞體細(xì)胞；植物細(xì)胞＞動(dòng)物細(xì)胞① 植物細(xì)胞全能性表達(dá)能力強(qiáng)：實(shí)踐表明，植物體的幾乎所有組織（如根、莖、葉、花藥、子房及幼胚等組織）的細(xì)胞，通過(guò)誘導(dǎo)都可再生新植株。所以植物的組織培養(yǎng)比動(dòng)物更方便。如擬南芥、煙草和番茄等能在多個(gè)世代中保持細(xì)胞全能性的表達(dá)；而小麥、要么和水稻等在多次繼代培養(yǎng)后會(huì)喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力。④植物克隆成功所需的條件：1）深入探討特定植物細(xì)胞全能性的表達(dá)條件（激素配比）；2）在植物克隆實(shí)驗(yàn)中，選擇性狀優(yōu)良、細(xì)胞全能性表達(dá)充分的基因型。（2） 培養(yǎng)過(guò)程：離體的植物器官、組織或細(xì)胞 ―→愈傷組織 ―→試管苗 ―→植物體愈傷組織：一種相對(duì)沒(méi)有分化的活的薄壁細(xì)胞團(tuán)組成的新生組織。再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷