【正文】 謝產(chǎn)物—蛻皮激素，并被認(rèn)為露水草的藥用價(jià)值主要是蛻皮激素的效用[8]。蛻皮激素首次發(fā)現(xiàn)是在1954年，Butenandt A和Karlson P從桑蠶蛹中分離鑒定出α蛻皮激素，之后又分離得到生物活性更強(qiáng)的β蛻皮激素。露水草性溫，味辛、微苦。 βecdysone 目 錄 1 1 1 3，儀器及試劑 3 3 6 6 9 9 10 11 13 13 13 13 13 13 14參考文獻(xiàn) 15致 謝 1715 露水草的研究現(xiàn)狀 露水草(Cyanotis arachnoidea)別名珍珠露水草，屬鴨跖草科藍(lán)耳草屬植物[1]，多年生草本，多生于海拔1100～2700m的亞熱帶山地草叢中、向陽緩坡針闊葉疏林下、草地、山野路邊等處。 Cyanotis arachnoidea。 (2) With the increase of salt concentration, Cyanotis arachnoidea leaves photosynthetic parameters, photosynthetic pigment content gradually reduced。結(jié)論：鹽脅迫抑制露水草的生長但促進(jìn)β蛻皮激素產(chǎn)物積累。Salt StressDepartment: College of Life Science and TechnologyMajor: BiotechnologyGrade: 2011Student’s Name: Student No.: 201101130277Tutor: Lecturer Tao HongZheng April, 2015摘 要 本研究利用不同濃度的中性鹽溶液處理露水草幼苗，并測(cè)定在不同濃度的鹽脅迫下露水草的各項(xiàng)生理指標(biāo)和次生代謝產(chǎn)物含量的變化，從而研究出最適合促進(jìn)露水草次生代謝產(chǎn)物含量增加的鹽濃度。Proportion ofPhysicson紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文 (設(shè)計(jì))2015年度本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）鹽脅迫對(duì)露水草生理和有效成分含量的影響院 － 系：生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 專 業(yè)：生物技術(shù) 年 級(jí)：2011 學(xué)生姓名： 學(xué) 號(hào)： 導(dǎo)師及職稱：（講師） 2015年4月2015 Annual Graduation Thesis (Project) of the College Undergraduate TheEffectTheandCyanotis arachnoidea by結(jié)果表明：（1）隨著鹽濃度的逐漸遞增，露水草葉片中相對(duì)電導(dǎo)率和丙二醛含量逐漸升高；（2）隨著鹽濃度的增加，露水草葉片中光合參數(shù)、光合色素含量逐漸減少；（3）隨著鹽濃度的增加，露水草全株植物中β蛻皮激素含量也隨著增加。 關(guān)鍵詞：鹽脅迫；露水草；生理指標(biāo)；β蛻皮激素 ABSTRACTIn this study, by using different concentrations of neutral salt solution treated Cyanotis arachnoidea seedling, and measuring the change of Cyanotis arachnoidea in physiological indicators and secondary metabolite at different concentrations of salt stress, thus study Cyanotis arachnoidea best suited to promote secondary metabolites were increased salt concentration. The results show that: (1) With the gradually increasing salt concentration, Cyanotis arachnoidea leaves relatively relative electric conductivity and MDA content also increased。 (3) with the increase of salt concentration, the whole Cyanotis arachnoidea βecdysone content also increases. Conclusion: salt stress inhibited Cyanotis arachnoidea growth but promote β ecdysone product accumulation.Key words: salt stress。 physiological indicators。云南除滇東北與滇西北的高寒山區(qū)外，全省大部分地區(qū)均有分布[2]，在紅河州石屏縣有大面積人工種植[3]，石屏露水草的加工利用是紅河州“十一五”期間重點(diǎn)建設(shè)的項(xiàng)目之一。露水草中次生代謝產(chǎn)物蛻皮激素是一種具有多種藥理作用的甾醇類化學(xué)物質(zhì)，主要作用有：(1）對(duì)合成核酸和蛋白質(zhì)具有促進(jìn)作用；（2）可以影響糖代謝，有可能成為一種新型的胰島素增敏劑；（3）對(duì)脂類代謝有促進(jìn)作用；（4）有益于尿素平衡，可保護(hù)腎臟功能；（5）對(duì)心律不齊有療效；（6）對(duì)淋巴系統(tǒng)有效應(yīng)，可調(diào)節(jié)免疫；（7）具抗氧化作用；（8）對(duì)腦梗死腦缺血有療效，可改善腦功能障礙；（9）可使內(nèi)皮細(xì)胞免受損傷；（10）對(duì)表皮細(xì)胞分化有促進(jìn)作用等[4] 。1966年，Nakanishi K等首次從白日青中分離得到植物蛻皮激素，隨后，又有更多的植物分離出了β蛻皮激素，并且發(fā)現(xiàn)在植物中蛻皮激素含量與昆蟲或節(jié)肢動(dòng)物相比高多許多，尤其是在露水草中，蛻皮激素的含量非常高，是現(xiàn)所知含β蛻皮激素最高的植物之一[56]，%， %[7]，所以露水草具有較高開發(fā)利用價(jià)值。傳統(tǒng)藥用價(jià)值主要體現(xiàn)為祛風(fēng)活絡(luò)，利濕消腫，退虛熱。外用于腳癬、濕疹，刀傷等。 鹽脅迫的研究現(xiàn)狀 由于農(nóng)業(yè)上化肥使用不當(dāng)，工廠污水隨意排放，氣候干旱，管理不完善等諸多因素，造成全球大部分地區(qū)土地鹽堿化越來越嚴(yán)重。中國鹽漬土總面積約 1108 hm2，其中現(xiàn)代鹽漬化土壤約0．37108 hm2， 殘余鹽漬化土壤約 108 hm2，潛在鹽漬化土壤約 108 hm2[10]。土壤鹽漬化是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)所面臨的主要問題之一，鹽分脅迫影響著植物產(chǎn)量、蛋白質(zhì)合成和光合作用以及能量代謝[11]。鹽脅迫對(duì)植物生長發(fā)育最普遍和最顯著的效應(yīng)就是抑制生長，表現(xiàn)為植株矮小和產(chǎn)量降低[12]。在一定鹽濃度下鹽脅迫可促進(jìn)植物次生代謝產(chǎn)物含量增加，次生代謝產(chǎn)物(Secondary metabolites)是由次生代謝產(chǎn)生的一類并非植物生長發(fā)育所必需的小分子有機(jī)化合物。目前國外對(duì)于環(huán)境條件對(duì)植株體內(nèi)次生代謝產(chǎn)物形成和積累的誘導(dǎo)作用機(jī)制有很多不同的認(rèn)識(shí)，提出了多個(gè)不同假說來解釋不同環(huán)境條件下植物次生代謝的變化。因此，環(huán)境脅迫有利于或促進(jìn)藥用植物次生代謝有效成分的積累。鹽脅迫是影響植物生長和產(chǎn)量提高的重要限制因子，因?yàn)辂}脅迫降低了環(huán)境的滲透勢(shì)而導(dǎo)致植物細(xì)胞失水，產(chǎn)生滲透脅迫，從而迫使植物在其自身范圍內(nèi)進(jìn)行相應(yīng)的滲透調(diào)節(jié)。雖然在植物的生長發(fā)育過程中，鹽脅迫會(huì)造成植物發(fā)育遲緩，抑制植物組織和器官的生長和分化，使植物的發(fā)育進(jìn)程提前，但是對(duì)于藥用植物的有效成分含量增加卻具有一定的促進(jìn)作用。韓立敏等[16]發(fā)現(xiàn)鹽脅迫處理促進(jìn)了丹參無菌苗中丹參素含量的影響。 實(shí)驗(yàn)材料，儀器及試劑 實(shí)驗(yàn)材料材料：露水草種子購于葆元種業(yè)。 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材N,N二甲基甲酰胺（DMF）、10%三氯乙酸（TCA）溶液、% 硫代巴比妥酸（TBA）溶液、中性鹽、無水乙醇、β 蛻皮激素、吸水紙、營養(yǎng)袋。L1，每個(gè)濃度處理5盆，每隔1d澆一次處理液，每盆每次澆100ml，處理10d后測(cè)定露水草光合參數(shù)、光合色素、丙二醛、相對(duì)電導(dǎo)率和蛻皮激素含量。實(shí)驗(yàn)步驟：①儀器安裝；②開機(jī)與校正；③參數(shù)設(shè)置及測(cè)定（飽和光強(qiáng)設(shè)為1000mols1，飽和二氧化碳設(shè)為500ppm），當(dāng)光合速率穩(wěn)定且胞間二氧化碳大于零時(shí)可以保存此次記錄，測(cè)定完一個(gè)數(shù)據(jù)時(shí)剪下測(cè)定部位的葉面積，并坐標(biāo)紙上畫上葉面積；④數(shù)據(jù)存取。min1離心10min，其上清液即為光合色素提取液。色素濃度按以下公式計(jì)算(位為mgg1樣品鮮重 （5） 相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定先用蒸餾水清洗帶塞子的玻璃試管2次，再用去離子水浸泡過夜，最后倒置晾干。然后用剪刀剪下（由于葉片太窄了不容易用打孔器打）葉面積大小差不多一致的葉片，放入干凈的玻璃試管中，加入10ml去離子水后將試管置于搖床上搖1h，測(cè)定電導(dǎo)率之前試管充分搖勻后用電導(dǎo)儀測(cè)定其初始電導(dǎo)值（S1）。測(cè)定過程中避免口中呼出的CO2進(jìn)入試管，影響測(cè)定結(jié)果，此外，溫度對(duì)溶液的電導(dǎo)率影響較大，必須在相同溫度條件測(cè)定電導(dǎo)率。由于對(duì)照組也有少量電解質(zhì)外滲，可按照下式計(jì)算由于鹽脅迫而產(chǎn)生的外滲，稱為傷害度（或傷害性外滲）。 丙二醛的測(cè)定丙二醛的提?。海尤?mL10%TCA研磨及少量石英砂，研磨至勻漿，再加4mL10%TCA進(jìn)一步研磨，勻漿置于離心管中，以4000r丙二醛的測(cè)定：取2ml丙二醛提取液（對(duì)照組加2mL蒸餾水），%TBA，混合液在沸水浴中保溫15min后，立即置于冰浴中冷卻，然后離心10min，于波長532nm、450nm下測(cè)定OD值。L1）=106106A450 （1）丙二醛含量（mgFW1）=[（106106A450）提取液體積1000]247。g1樣品鮮重 （3） 蛻皮激素測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)量：精密稱取β蛻皮激素對(duì)照品10mg，加10ml乙醇，配置為1mg用母液配制成濃度為0、蛻皮激素提取：將露水草苗連根拔出洗干凈后在電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱105℃下殺青20分鐘，接著在65℃下烘干至恒定質(zhì)量后研磨成粉，加2mg活性炭，浸泡并用超聲波在50MHz下提取30min，10000r樣品蛻皮激素含量（mgDW1）=樣品液濃度（mg樣品干重（g）。 鹽脅迫對(duì)露水草光合參數(shù)的影響 由表1可知，鹽濃度為90molL1時(shí)，%，%，%，而對(duì)于胞間二氧化碳影響最大的鹽濃度是120 mmol表1鹽脅迫對(duì)露水草葉片光合參數(shù)的影響（1000umolm2）(平均值177。L1凈光合速率蒸