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生物化學實驗課件1動態(tài)-展示頁

2025-01-25 06:47本頁面
  

【正文】 離純化實驗。 3. 加樣:用微量進樣器加入 7μl標準蛋白于中間膠槽內 →其余槽內加入 7μl下列樣品①牛血清蛋白②綠豆分離蛋白 4. 電泳:連接電極線,高板外側接正極,低板內側槽接負極,打開電源 →調電流120mA→電泳 2h(當指示劑前沿超過二分之一膠長時停止) 5. 剝膠:取下膠板倒去電極緩沖液 →量取指示劑遷移距離和染色劑的前膠長,然后將膠板置于水龍頭下方沖玻板四周直至膠與玻璃板分離 6. 染色與固定:將膠板放入染色盒內 →向其中加入 %考馬斯亮藍 R250使其浸沒置于搖床上染色過夜 7. 脫色:用 10%乙酸溶液脫色至譜帶清晰,測定脫色后膠長及各譜帶遷移距離。 三、儀器和試劑 1.主要儀器 ( 1)電泳儀 ( 2)電泳槽 2. 試劑 ( 1)電極緩沖液 ( 2) PH 凝膠緩沖液 ( 3) 1%TEMED, ( 4) 30%凝膠儲液, ( 5) 10%過硫酸銨 ( 6) %考馬斯亮藍 R250染色液 ( 4) 10%乙酸脫色液 四、實驗步驟 1. 電泳槽的安裝:取兩塊玻璃板 →將帶玻璃條的板(高板)放置桌面上 →在上面放置“ U”型橡膠條 →最后將凹槽玻璃板(低板)壓在高板上,置于電泳槽內,用鍥子壓緊。 在聚丙烯酰胺凝膠系統中,加入一定量的十二烷基硫酸鈉( SDS),使所有蛋白質顆粒表面覆蓋一層 SDS分子,導致蛋白質分子間原有的電荷差異消失,此時,蛋白質分子的電泳遷移率主要取決于它的分子量大小。 五、結果計算 六、思考題 )展開劑前沿移動距離()(斑點中心到點樣點距離abR ?f實驗三 蛋白質分子量測定 一、實驗目的 掌握電泳基本原理 、 分類 、 影響因素 , SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳用途 ,凝膠制備 ?!?cm) 展層:將濾紙卷成筒狀且不能夠重疊 , 并用棉線扎緊然后垂直放入培養(yǎng)皿中進行展層 2h( 當展開劑沿到達濾紙長度三分之二時 , 即可取出 ) 測量展開劑前沿移動距離 ( a) 顯色:用 %茚三酮 丙酮溶液朝點樣面噴霧 ( 不要噴得太多 ) 然后將濾紙置于電爐上方 20cm處加熱直至斑點出現為止 ,測量各斑點中心到點樣點距離 ( b) ? 1.計算出各種氨基酸的 Rf值,并根據 Rf值鑒定出混合氨基酸中的各組分,在層析圖譜上標出各氨基酸名稱。 三、儀器和試劑 主要儀器: ( 1)層析缸 ( 2)微量進樣器 ( 3)噴霧器 試劑 : ( 1)展開劑:乙醇:水:冰乙酸= 50:10:1 ( 2)氨基酸溶液: %的賴氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸溶液及它們的混合液 ( 3)顯色劑: %水合茚三酮丙酮溶液。 有機溶劑自上而下流動 , 稱為下行層析;自下而上流動 , 稱為上行層析 。 取濾液 20ml置于旋光管中,先用 1%HCl 調節(jié)旋光儀“ 0”點,然后將樣品溶液放入旋光儀中測 α 六、思考題 ? 樣品加鹽酸處理時 , 煮沸時間少于或多于 15min會對測定結果產生什么影響 ? ? 五 、 結果計算 ? ? 100.10020 ???WLD??淀粉含量(%)=表 1- 1不同 谷物 淀粉的比旋光度 品種 品種 小麥 馬鈴薯 黑麥 小米 大麥 蕎麥 水稻 燕麥 玉米 [α]D20 ? ?):樣品質量( gdm2WLD???其中 : 實驗二 氨基酸的紙上層析 一、實驗目的 通過對氨基酸的分離 , 學習紙層析法的基本原理及操作方法 。 ⑶ 15%亞鐵氰化鉀溶液。 其在 171~ 195之間 , 因此可用旋光法測定粗淀粉的含量 。 二、實驗原理 ? 在加熱及稀鹽酸的作用下 , 淀粉水解并轉入鹽酸溶液中 。 實驗一 淀粉含量測定 一、實驗目的 1. 掌握旋光儀的操作使用。 9. 實驗完畢后,要求整理、清潔實驗臺面,檢查水、電、氣源,打掃實驗室衛(wèi)生。實驗廢液、廢物按要求放入指定收集器皿。 6. 實驗中,保持安靜,認真操作,仔細觀察,積極思維,實驗過程中必須有原始記錄,不得擅自離開崗位。 5. 使用藥品時,要求明確其性質及使用方法后,據實驗要求規(guī)范使用。 3. 進入實驗室后,要熟悉周圍環(huán)境,熟悉防火及急救設備器材的使用方法和存放位置,遵守安全規(guī)則。 主要包括: a、 目的 , b、 原理 , c、 操作步驟及實驗性質 、 現象 , d、 數據處理 ( 含誤差原因及分析 ) , e、 討論 , f、思考題回答 。 自己難以解釋時可請老師解答 。 做到輕 ( 動作輕 、 講話輕 ) , 細 ( 細心觀察 、 細致操作 ) , 準 ( 試劑用量準確 、 結果及其記錄準確 ) , 潔 ( 使用的儀器清潔 , 實驗桌面整潔 , 實驗結束把實驗室打掃清潔 ) 。 學習方法 預習:實驗前必須進行充分的預習和準備 , 并寫出預習報告 , 做到心中有數 , 這是做好實驗的前提 。 生物化學實驗 河南工業(yè)大學生物工程學院 生物技術系 Henan University of Technology 實驗內容 1. 淀粉含量測定 2. 氨基酸的紙上層析 3. 蛋白質分子量測定 4. 淀粉酶活力測定 5. 蛋白質含量測定 6. 甲醛滴定測氨基氮 7. 酵母 RNA的提取、組分鑒定和含量測定 8. 賴氨酸含量測定 9. 凝膠層析法分離蛋白質 10. 蔗糖酶的提取與部分純化 11. 蔗糖酶活力的測定 12. Bradford法測定蛋白質含量 教學目的 生物化學是專業(yè)基礎實驗課 , 其先修課程為無機化學 、 分析化學和有機化學 。 其目的是:學習和掌握生物技術 , 培養(yǎng)動手觀察和思維能力 。 操作:應按擬定的實驗操作計劃與方案進行 。 在實驗全過程中 , 應集中注意力 , 獨立思考解決問題 。 寫實驗報告:做完實驗后 , 應解釋實驗現象 , 并作出結論 , 或根據實驗數據進行計算和處理 。 實驗室守則 生物化學實驗室守則是學生實驗正常進行的保證,學生進入實驗室必須遵守以下規(guī)則: 1. 進入實驗室,須遵守實驗室紀律和制度,聽從老師指導 2. 未穿實驗服、未寫實驗預習報告者不得進入實驗室進行實驗。 4. 實驗前,清點、檢查儀器、明確儀器規(guī)范操作方法及注意事項,否則不得動手操作。禁止使用不明確藥品或隨意混合藥品。 7. 實驗室公用物品(包括器材、藥品等)用完后,應歸放回原指定位置。 8. 愛護公物,注意衛(wèi)生,保持整潔,節(jié)約用水、電、氣及器材。 10. 實驗記錄經教師簽名認可后,方可離開實驗室。 2. 了解旋光法測粗淀粉的基本原理。 在一定的水解條件下 , 不同谷物淀粉的比旋光度是不同的 。 三、實驗儀器和試劑 主要儀器: ( 1)旋光儀 ( 2)電子天平(感量 ) 試劑: ⑴ 1%鹽酸溶液 ⑵ 30%硫酸鋅溶液。 四、實驗步驟 在電子天平上稱取小麥粉 →加入50ml 1%HCl混成漿狀(不能有結塊) →沸水浴中準確加熱 15min→先加 1ml 30% ZnSO4混勻 →再加 1ml 15%亞鐵氰化鉀混勻 →移至 100ml容量瓶中加水定容混勻后過濾→棄去最初 15ml收集其余濾液。 二 、 實驗原理 紙層析是以濾紙作為惰性支持物的分配層析 , 濾紙纖維上的- OH具有親水性 , 因此能吸附一層水作為固定相 , 而通常把有機溶劑作為流動相 。 流動相流經支持物時與固定相之間連續(xù)抽提 , 使物質在兩相之間不斷分配而得到分離 。 四、實驗步驟 平衡:將展開劑 ( 乙醇:水:冰乙酸= 50:10:1) 放入培養(yǎng) 皿中置于密閉容器內使其充滿展開劑 ( 24h左右 ) 點樣:取濾紙 1張用鉛筆在距下方 2cm處劃線并將所得線段分成 5等分從而得到 4個標記點
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