抗體制藥pappt課件-展示頁(yè)
2025-01-17 04:50本頁(yè)面
【正文】 第五節(jié) 抗體工程 一、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的基本方法 二、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的特點(diǎn) 三、基因工程抗體的表達(dá) 第五節(jié) 抗體工程 一般都是從提取 RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄 PCR獲取抗體某一特定基因區(qū)段，如重鏈和輕鏈可變區(qū)（ VH、 VL）基因。 第五節(jié) 抗體工程 現(xiàn)在普遍使用的噬菌粒（ phagemid）載 體，具有噬菌體和質(zhì)粒的共同特點(diǎn)。 第五節(jié) 抗體工程 淘篩的基本過程是：抗原固相化后，對(duì)噬菌粒群的吸附、洗滌和洗脫后在感染擴(kuò)增 ，與輔助噬菌體超感染獲得大容量次級(jí)文庫(kù) ，在反復(fù)與抗原吸附，經(jīng)幾輪淘篩后，淘汰了非目的克隆，是目的克隆大量地?cái)U(kuò)增。 第五節(jié) 抗體工程 遺傳工程鼠 人抗體鼠： 將小鼠 lg基因滅活，然后轉(zhuǎn)入人 lg基因，生產(chǎn)出人單抗 第五節(jié) 抗體工程 噬菌體抗體庫(kù)技術(shù) 將抗體全套可變區(qū)間基因組裝到噬菌體載體，并 表達(dá)于噬菌體表面，所得到的多樣性噬菌體抗體的集 合，稱為 噬菌體抗體庫(kù) 。 第五節(jié) 抗體工程 噬菌體抗體庫(kù)的分類 ㈠ 按抗體基因的性質(zhì)分 1. DNA 文庫(kù) 2. cDNA 文庫(kù) ㈡ 按抗體基因的來源分 1. 天然抗體庫(kù)（ native antibodu library） 2. 免疫抗體庫(kù) 3. 半合成抗體庫(kù) 4. 全合成抗體庫(kù) 第五節(jié) 抗體工程 噬菌體展示技術(shù)的原理 第五節(jié) 抗體工程 噬菌體展示技術(shù)是將各種多肽或蛋白質(zhì)以融合蛋白的形式表達(dá)并展示在噬菌體表面，同時(shí)將其遺傳密碼包含于噬菌體內(nèi)部，這使得蛋白質(zhì)的功能與其基因密碼有機(jī)的連接在一起。 第五節(jié) 抗體工程 噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的優(yōu)勢(shì) ? 可實(shí)現(xiàn)單抗的小型化 ? 可實(shí)現(xiàn)單抗的多功能化 ? 簡(jiǎn)單易行、生產(chǎn)成本低、篩選容量大、 可通過發(fā)酵生產(chǎn)、大量制備 單克隆抗體 噬菌體抗體 雜交瘤技術(shù) 展示技術(shù) 宿主細(xì)胞 雜交瘤 細(xì)菌 篩選范圍 ~103 107~109 時(shí)間 幾個(gè)月 幾周 操作 繁雜 相對(duì)簡(jiǎn)單 免疫 必須 可避免 人源抗體 — + 費(fèi)用 高 低 生產(chǎn)量 有限 無限 基因獲取 再克隆 直接 應(yīng)用前景 有限 不可估 第五節(jié) 抗體工程 第五節(jié) 抗體工程 三、基因工程呢抗體的表達(dá) 原核表達(dá) 大腸桿菌 真核細(xì)胞表達(dá) 哺乳動(dòng)物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、酵母 轉(zhuǎn)基因植物表達(dá) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物表達(dá) 第五節(jié) 抗體工程 抗體在體外人源化存在的問題 ? 操作過程復(fù)雜 ? 需付出昂貴的代價(jià) ? 抗體的親
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