植物病原細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)-展示頁
2025-01-15 05:28本頁面
【正文】 破口處涌出 （一）細(xì)菌溢現(xiàn)象觀察 （ 1） 斑點(diǎn)型：如棉花角斑病 。 三、作業(yè) 實(shí)驗(yàn)二 植物病原細(xì)菌的分離 和致病性測定 二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和操作方法 （ 1） 首先要選擇典型 、 新鮮病組織 。 凡帶有膠皮的物品，液體及固體培養(yǎng)基等都不能用此法滅菌 。一般是把待滅菌的物品包裝就緒后，放入電烘箱中烘烤，即加熱至 160～ 170℃ 維持 1～ 2h。 注意不能過早過急地排氣，否則會(huì)由于瓶內(nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶內(nèi)液體沖出容器之外。 升壓、保壓和降壓 當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時(shí)，即可關(guān)閉排氣閥，壓力開始上升。 排氣 打開放氣閥。注意水要加夠，防止滅菌過程中干鍋。 一般 培養(yǎng)基、玻璃器皿以及傳染性標(biāo)本和工作服 等都可應(yīng)用此法滅菌。 高壓蒸汽滅菌法 高壓蒸汽滅菌用途廣，效率高，是基于水的沸點(diǎn)隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設(shè)計(jì)的。 加熱滅菌包括濕熱和干熱滅菌兩種。 ?滅菌方法 滅菌是指殺死或消滅一定環(huán)境中的所有微生 物，滅菌的方法分物理和化學(xué)滅菌法兩大類。 ?明膠培養(yǎng)基滅菌 1215分鐘。 普通培養(yǎng)基為 121℃ 20~30min， 以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份。 10. 石蕊牛乳反應(yīng) （ 1） 配方： 脫脂牛乳 1000 ｍ L ， 石蕊液 （ 4%） 1520 mL。 9. 淀粉水解試驗(yàn) （ 1） 配方： 牛肉浸膏 g， 蛋白胨 ， 淀粉 g， 瓊脂 1520 g， 蒸餾水 1000 ｍ L。 8. 明膠液化 （ 1） 配方： 牛肉浸膏 ， 蛋白胨 ， 明膠 1012%， 蒸餾水 1000ｍ L。 7. 吲哚試驗(yàn) （ 1） 配方： 蛋白胨 ， 磷酸氫二鈉 ，葡萄糖 ， 蒸餾水 1000ｍ L。 6. 半胱氨酸培養(yǎng)液：測定產(chǎn) H2S能力 （ 1） 配方：蛋白胨 10ｇ ， 硫酸鈉 ， 半胱氨酸 ， 蒸餾水 1000ｍ L。 （ 2） 配制過程：將蛋白胨 、 葡萄糖 、 磷酸氫二鉀溶于蒸餾水 ， 調(diào)節(jié) ， 每管分裝5mL即可 。 產(chǎn)酸時(shí)培養(yǎng)液變黃 ， 產(chǎn)堿時(shí)變藍(lán) ， 產(chǎn)氣則小玻管內(nèi)培養(yǎng)液被部分排出 ， 出現(xiàn)空隙 。 有的細(xì)菌不產(chǎn)酸和氣 ， 有的只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 ， 少數(shù)植物病原細(xì)菌既產(chǎn)酸又產(chǎn)氣 （ 3） 分裝：將上述培養(yǎng)基分裝于試管中 ， 每管 10 mL左右 。 1%碳素化合物 。 好氧性細(xì)菌，只在開管的上部生長；兼性厭氧性細(xì)菌，則在開管的上下部都能生長；厭氧性細(xì)菌，則只能在開管的下部和閉管中生長。培養(yǎng)基凝固后，用接種針蘸細(xì)菌懸浮液針刺接種，一直刺到管底。 (NA)：分離和培養(yǎng)最常用 （ 2） 配制過程：將牛肉膏 、 蛋白胨 、 NaCl 溶于蒸餾水后 ， 調(diào)節(jié) ， 加入瓊脂溶化后分裝于三角瓶和試管 。植物病原細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)一 植物病原細(xì)菌常用培養(yǎng)基 的制作與滅菌 ； ； 。 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和操作方法 （ 1） 配方：牛肉膏 3ｇ ， 蛋白胨 10ｇ ， NaCl 5ｇ ， 瓊脂 20ｇ ， 蒸餾水 1000 ｍ L。 （一）培養(yǎng)基的配制 2. Hugh和 Leifson（ HL）培養(yǎng)基：細(xì)菌的好氧性和厭氧性測定 蛋白胨 g 氯化鈉 g 磷酸氫二鉀 g 瓊脂 g 蒸餾水 ml pH ~ 溴百里酚蘭（ ％酒精溶液 ml） 待培養(yǎng)基融化，并調(diào) pH后，裝于試管中，每支試管 裝 9 ml 滅菌。分別在培養(yǎng) 4和 7 d后觀察記錄。 （ 1 ） 配方： ｇ ， 氯化鉀 0 . 2 ｇ ， ， 蒸餾水 1000 ｍ L， 溴百里酚蘭（ %酒精溶液 ） mL。 ：碳素化合物產(chǎn)酸試驗(yàn) 單糖 （ 葡萄糖 、 半乳糖 ） ；雙糖 （ 麥芽糖 、 乳糖 ） ；多糖 （ 淀粉 ） ；醇 （ 甘露醇 ） 。 如果測定氣體產(chǎn)生 ， 加上杜氏發(fā)酵小玻管后滅菌 。 （ 2 ） 配 制 過 程 ： 將 NH4H2PO4 、 氯化鉀 、 ， 調(diào)節(jié) 酚蘭 ， 最后加入碳素化合物 （ 也可分別滅菌后加入 ） 4. MR和 VP試驗(yàn)：對(duì)葡萄糖的分解能力 （ 1） 配方：蛋白胨 5ｇ ， 葡萄糖 5ｇ ， 磷酸氫二鉀 5ｇ ， 蒸餾水 1000 ｍ L。 5. 硝酸鹽還原 （ 1） 配方：硝酸鉀 ， 蛋白胨 ， 酵母膏 ， 蒸餾水 1000ｍ L， （ 2） 配制過程：將硝酸鉀 、 蛋白胨 、 酵母膏稱好后 ， 溶解于蒸餾水后 ， 調(diào)節(jié) pH。 （ 2） 配制過程：將半胱氨酸 、 蛋白胨 、 硫酸鈉稱好后 ， 溶解于水中 ， 調(diào)節(jié) 。 （ 2） 配制過程：將蛋白胨等稱好后 ， 溶解于蒸餾水 ， 調(diào)節(jié) 。 （ 2） 配制過程：將牛肉浸膏 、 蛋白胨溶解于蒸餾水中 ， 調(diào)節(jié) ， 將明膠溶解于此溶液中 ， 即可分裝于試管中 。 （ 2）配制過程：將牛肉浸膏、蛋白胨、淀粉稱好后，溶解于蒸餾水中，加入稱好的瓊脂，待融化后調(diào)節(jié) 。 （ 2） 配制過程：提前配制石蕊液 （二）培養(yǎng)基的滅菌 上述培養(yǎng)基應(yīng)按培養(yǎng)基配方中規(guī)定的條件及時(shí)進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，如需要作斜面固體培養(yǎng)基，則 滅菌后立即擺放成斜面 ， 斜面長度一般以不超過試管長度的1/2為宜 ；半固體培養(yǎng)基滅菌后，垂直冷凝成半固體深層瓊脂。 ?石蕊牛乳培養(yǎng)基間歇滅菌 3次，每次通蒸汽 2030 分鐘。 ?本實(shí)驗(yàn)主要介紹物理方法的一種，即加熱滅菌。 通過加熱使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)凝固變性，從而達(dá)到殺菌目的。 當(dāng)蒸汽壓力達(dá)到 ，水蒸氣的溫度升高到 121
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