全內(nèi)反射熒光顯微鏡-展示頁
2025-05-24 02:56本頁面
【正文】 θ1=n2 sin θ2 當 n1大于 n2時，全反射就可能發(fā)生 : θ2=90176?？梢钥吹綐悠繁砻?，單分子的活動情況。 1996年 Moerner小組又用這項技術(shù)實現(xiàn)了限制在丙烯酰胺膠體的納米孔中的單分子的三維成像。將全反射理論與生物細胞的熒光成像技術(shù)相結(jié)合是一種全新的突破。 1995年 Yanagida小組用 TIRFM技術(shù)首次在液體溶液中得到了熒光標記的單個蛋白質(zhì)分子的成像。 全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)的發(fā)展歷程 Hirsch field 完成了 第一個 全內(nèi)反射 熒光實驗 1965年 Axelrod等生物物理 學家對 TRIFM技術(shù) 及基本原理進行描 述，并探索了其生 物應(yīng)用。 發(fā)展歷史 全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)的發(fā)展歷程 近年來人們開發(fā)出了一系列光學顯微鏡。全內(nèi)反射熒光顯微鏡 醫(yī)學實驗 05級 張園 鄭雪飛 宋一萌 解依荻 發(fā)展歷史 優(yōu)勢應(yīng)用 分型及結(jié)構(gòu) 基本原理 發(fā)展與展望 發(fā)展歷史 熒光顯微鏡的概念 全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)的發(fā)展歷程 細胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一。 發(fā)展歷史 熒光顯微鏡的概念 在細胞生物學方面，傳統(tǒng)光學顯微鏡始終不能解決生物樣本顯微中的幾個重要問題： 信噪比 不高； ； 分辨極限 （ R ≥0. 61λ/nsinθ ）： 傳統(tǒng)的光學顯微鏡由于受到 光瞳遠場衍射效應(yīng) 的影響 ,存在分辨極限 ,瑞利將之歸納為 R ≥0. 61λ/nsin(u/2) ,其中 R為分辨力 ,λ 為成像光波波長 , nsin(u/2)為物透鏡的 數(shù)值孔徑 ,即 NA 值， u為孔徑角 ,因此光學顯微鏡空間分辨極限～ 250 nm。其中， 全內(nèi)反射熒光顯微術(shù) (Total internal reflection fluorescence microscopy ,TIRFM)是近年來新興的一種光學成像技術(shù)。 20世紀 80年代早期 20世紀 90年代 新型物鏡透鏡、聚光鏡和超靈敏探測器的出現(xiàn)，使 TRIFM技術(shù)得到充分發(fā)展。 這是首次嘗試用全內(nèi)反射熒光法測液體中的單個分子的熒光。 肌球蛋白酶活性測量，肌收縮力的產(chǎn)生， 熒光標記驅(qū)動蛋白動態(tài)研究。 基本原理 全內(nèi)反射熒光顯微鏡 的基本設(shè)計思路 全內(nèi)反射熒光顯微鏡 的基本原理 全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)是利用全內(nèi)反射產(chǎn)生的消逝波激發(fā)樣品 ,從而使樣品表面數(shù)百納米厚的薄層內(nèi)的熒光團受到激發(fā) ,熒光成像的信噪比大大提高。這種方法的成像裝置簡單，極易和其它成像技術(shù)、探測技術(shù)相結(jié)合，目前已成功的實現(xiàn) 100nm甚至更低的空間分辨率。 θc=sin1(n2/n1) 即所有的入射光線全部反射出來 ,稱為全內(nèi)反射 熒光激發(fā)原理 沿著入射面上的介質(zhì)邊界傳播 在平行界面方向以平行波場方式傳播 在垂直界面方向則是呈指數(shù)衰減。 熒光激發(fā)原理 箭頭 表示激光的方向，激光被全反射，同時產(chǎn)生在 z方向成指數(shù)衰減的隱失波。 CCD相機 CCD相機的 高靈敏度 特點使全內(nèi)反射熒光顯微
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