全內(nèi)反射熒光顯微鏡-閱讀頁
2025-06-01 02:56本頁面
【正文】 是正因為膜與固體支撐物具有相互作用，以及消逝波強度的指數(shù)性下降而導致單分子信號的指數(shù)性下降，使得對結(jié)果的解釋具有一定的困難性。 The application of the total internal reflection fluorescence microscopy 解依荻 全內(nèi)反射應(yīng)用的核心問題 ?全內(nèi)反射應(yīng)用的核心問題是制作與電子顯微術(shù)（ EM）切片尺寸相當?shù)墓鈱W切片。 ? 全內(nèi)反射顯微術(shù) : 典型的垂直照明深度100nm。 全內(nèi)反射的應(yīng)用 ?在生物單分子研究中的應(yīng)用 ? 直接觀察細胞表面的生命活動 ,而不受細胞深層區(qū)域信號的干擾 . ? 全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)的熒光激發(fā)深度只在～ 200ｎｍ的薄層范圍內(nèi) ,從而成為研究細胞表面科學如生物化學動力學、單分子動力學的最有前途的光學成像技術(shù)。因為激發(fā)光呈指數(shù)衰減的特性，只有極靠近全反射面的樣本區(qū)域會產(chǎn)生熒光反射，大大降低了背景光噪聲干擾觀測標的，故此項技術(shù)廣泛應(yīng)用于細胞表面物質(zhì)的動態(tài)觀察。 ? CLSM的重要優(yōu)勢在于，它提供了僅從單光學薄層收集光波的可能性。但是這個光學薄層的厚度大約為 500800nm，要大于全內(nèi)反射熒光顯微鏡的光學薄層的厚度（ 200nm）。 生物單分子熒光檢測技術(shù)的比較 共聚焦激光掃描顯微（ CLSM） 雙光子激光掃描顯微鏡（ TPLSM） 全內(nèi)反射熒光顯微鏡（ TIRFM） 共同點 檢測細胞熒光物質(zhì)的技術(shù) —— 空間分辨熒光分析技術(shù) 區(qū)別點 CLSM提供了僅從單光學薄層收集光波的可能性。 不要求高于衍射極限的分辨率 TPLSM對生物系統(tǒng)和體內(nèi)細胞性質(zhì)具有高的分辨率。 減少了光損傷，特別對需要條件溫和的生物體系有利 TIRFM具有高度的界面（表面）特異性，可有效排除本體干擾，獲取界面信息。 全內(nèi)反射熒光法相對簡單，費用低廉 。它的未來發(fā)展將是怎樣的呢？ ? 它將向著兩個前沿方向發(fā)展：技術(shù)上的進一步創(chuàng)新和在新的細胞生命科學領(lǐng)域中的應(yīng)用。 全內(nèi)反射熒光顯微鏡的改進 1. 光電探測設(shè)備探測效率和探測速度的提高 ? 新型的物鏡透鏡、聚光器和其它材料的引入 2. 單分子染色技術(shù)的發(fā)展 新型的物鏡透鏡、聚光器和其它材料的引入 ? 超高的信噪比，能夠得到完美的圖像 ? 嶄新的 UIS2物鏡的信噪比優(yōu)越，高于現(xiàn)有物鏡50%。 UIS2系統(tǒng)在弱激發(fā)光下，能夠有效探測極弱熒光，從而建立了活細胞熒光成像的新標準。提高較寬波長范圍內(nèi)的性能使它非常適合當今最需要的研究用途。這一系列物鏡在使用覆蓋很寬譜帶的熒光進行多色觀察時，可以獲得出色的清晰圖像而不產(chǎn)生顏色偏移。 ? 后下光口 ? 能夠安裝冷 CCD DP30BW與同類設(shè)備。 與雙光口視頻適配器結(jié)合，能夠獲得兩個原始圖像。 新型的物鏡透鏡、聚光器和其它材料的引入 ? 提高了近紅外透過率 ? IX2系列采用 UIS2 光學系統(tǒng)，提高了側(cè)光口、后光口和底光口的紅外透過率，能夠提供多方面的高性能，以適應(yīng)未來研究的需要。在生物學的應(yīng)用上 ,由于全內(nèi)反射熒光成像的獨特優(yōu)勢，它將成為細胞基底接觸區(qū)域內(nèi)的豐富的細胞生命活動，如細胞膜內(nèi)蛋白質(zhì)的動力學過程，基底附近的細胞骨架，細胞運動等最強有力的探測方法。 ? 我們有理由相信隨著光電探測設(shè)備探測效率和探測速度的提高以及單分子染色技術(shù)的發(fā)展，全內(nèi)反射熒光成像技術(shù)將越來越生動的把細胞內(nèi)的生物世界展現(xiàn)在我們
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