全內(nèi)反射熒光顯微鏡(存儲(chǔ)版)
【正文】 單個(gè)熒光分子的直接探測(cè)。所以應(yīng)該盡量降低背景激發(fā)光。 ? 分子伴侶蛋白 GroEL和伴侶輔助分子 (cochaperon)GroES或者其底物乳球蛋白的相互作用已經(jīng)在單分子水平進(jìn)行了很好的研究。 全內(nèi)反射熒光顯微鏡下拍到 的位于表面的 ActinYFP和 TubulinYFP蛋白分子圖 分別在全內(nèi)反射熒光顯微鏡下（左）和 一般熒光顯微鏡（右）拍到的 Dilstainedneuron,細(xì)胞。 全內(nèi)反射的應(yīng)用比較 ?與其他生物單分子研究技術(shù)的比較 全內(nèi)反射熒光顯微鏡（ TIRFM） 共聚焦激光掃描顯微鏡（ CLSM） 雙光子激光掃描顯微鏡（ TPLSM） 全內(nèi)反射的應(yīng)用比較 ? 全內(nèi)反射熒光顯微鏡（ TIRFM） ? 全內(nèi)角反射熒光顯微鏡（ total internal reflection fluorescence microscope， TIRFM），利用光線全反射后在介質(zhì)另一面產(chǎn)生衰逝波的特性，激發(fā)熒光分子以觀察熒光標(biāo)定樣品的極薄區(qū)域，觀測(cè)的動(dòng)態(tài)范圍通常在 200 nm以下。與聚焦平面共軛的針孔定位（即共焦）可避免來(lái)自檢測(cè)器之外的光，即從聚焦平面以外的其它地方反射 /發(fā)射過(guò)來(lái)的光。這意味著在一方面全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)將繼續(xù)和其它的顯微成像技術(shù)，如熒光相關(guān)光譜技術(shù)，熒光壽命成像技術(shù)以及原子力顯微術(shù)相結(jié)合；另一方面，繼續(xù)尋求成像原理上的突破，這也正是目前有待積極探索的課題。 新型的物鏡透鏡、聚光器和其它材料的引入 ? 雙層多光口設(shè)計(jì)保證了輸入 /輸出靈活性 新型的物鏡透鏡、聚光器和其它材料的引入 ? 后上光口 ? 后上光口不改變載物臺(tái)高度，所以不影響鏡架穩(wěn)定性 這一光口可做光路輸入口，可裝一個(gè)附加熒光照明器 ? 右側(cè)光口 ? 右側(cè)光口裝置（ IX2RSPC2:可選件，視場(chǎng)數(shù)： 16）帶有一個(gè)結(jié)像透鏡，可以安裝一個(gè) C型接口 CCD照相機(jī)。 如細(xì)胞膜內(nèi)蛋白質(zhì)的動(dòng)力學(xué)過(guò)程，基底附近的細(xì)胞骨架，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等。 展望前景 ? 雙色和多色全內(nèi)反射熒光激發(fā)在國(guó)際上剛嶄露頭角。 新型的物鏡透鏡、聚光器和其它材料的引入 ? 有效消除直到近紅外范圍的色差 ? 杰出的超級(jí)復(fù)消色差特點(diǎn)有效地消除了從可見(jiàn)光譜直到 1000nm范圍內(nèi)的色差 , 意味著從紫外到紅外范圍內(nèi)的成像都可以只用一個(gè)物鏡實(shí)現(xiàn)。 表面或界面單分子的測(cè)定 展望前景 ? 不論是對(duì)物理成像學(xué)家還是對(duì)細(xì)胞生物學(xué)家而言，全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)均是一項(xiàng)新的技術(shù)。 ? TPLSM對(duì)生物系統(tǒng)和體內(nèi)細(xì)胞性質(zhì)具有高的分辨率，如細(xì)胞器，細(xì)胞連接，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，細(xì)胞膜流動(dòng)性。 ? 結(jié)論：薄的光學(xué)層析層切片信噪比強(qiáng)； 細(xì)胞的光損傷和光漂白影響也很小。利用全內(nèi)反射熒光顯微鏡結(jié)合后來(lái)發(fā)展的熒光共振能量轉(zhuǎn)移或者雙視角的光鏡可以看到離子通道與其配基或者調(diào)節(jié)子之間的相互作用，同時(shí)可以在體內(nèi)跟蹤構(gòu)像變化與離子電流。肌球蛋白分子上熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光光譜隨著時(shí)間的起伏現(xiàn)象，說(shuō)明了自發(fā)的肌球蛋白單分子構(gòu)像改變。 1. 全內(nèi)反射熒光顯微術(shù) 在生物單分子科學(xué)中的應(yīng)用 ? 單分子熒光探測(cè)主要有三個(gè)問(wèn)題： ? （ 1）單分子發(fā)出的熒光信號(hào)通常是很 微弱的，所以要尋找一個(gè)足夠靈敏的探測(cè)器。 θc 為發(fā)生全反射的臨界角。 全內(nèi)反射顯微鏡的分型及其結(jié)構(gòu) ? 全內(nèi)反射熒光顯微鏡根據(jù)其成像系統(tǒng)的不同可分為棱鏡型和物鏡型兩種類型 兩種類型的全內(nèi)反射熒光顯微鏡成像系統(tǒng)， 1）為棱鏡型， 2）
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