全內(nèi)反射熒光顯微鏡-免費(fèi)閱讀
【正文】 在生物學(xué)的應(yīng)用上 ,由于全內(nèi)反射熒光成像的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，它將成為細(xì)胞基底接觸區(qū)域內(nèi)的豐富的細(xì)胞生命活動(dòng)，如細(xì)胞膜內(nèi)蛋白質(zhì)的動(dòng)力學(xué)過(guò)程，基底附近的細(xì)胞骨架，細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等最強(qiáng)有力的探測(cè)方法。這一系列物鏡在使用覆蓋很寬譜帶的熒光進(jìn)行多色觀察時(shí)，可以獲得出色的清晰圖像而不產(chǎn)生顏色偏移。它的未來(lái)發(fā)展將是怎樣的呢？ ? 它將向著兩個(gè)前沿方向發(fā)展：技術(shù)上的進(jìn)一步創(chuàng)新和在新的細(xì)胞生命科學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用。 生物單分子熒光檢測(cè)技術(shù)的比較 共聚焦激光掃描顯微（ CLSM） 雙光子激光掃描顯微鏡（ TPLSM） 全內(nèi)反射熒光顯微鏡（ TIRFM） 共同點(diǎn) 檢測(cè)細(xì)胞熒光物質(zhì)的技術(shù) —— 空間分辨熒光分析技術(shù) 區(qū)別點(diǎn) CLSM提供了僅從單光學(xué)薄層收集光波的可能性。 全內(nèi)反射的應(yīng)用 ?在生物單分子研究中的應(yīng)用 ? 直接觀察細(xì)胞表面的生命活動(dòng) ,而不受細(xì)胞深層區(qū)域信號(hào)的干擾 . ? 全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)的熒光激發(fā)深度只在～ 200ｎｍ的薄層范圍內(nèi) ,從而成為研究細(xì)胞表面科學(xué)如生物化學(xué)動(dòng)力學(xué)、單分子動(dòng)力學(xué)的最有前途的光學(xué)成像技術(shù)。 ? 用于 DNA大分子在液 液、固 液界面的單分子吸附行為 。 ? 通過(guò)熒光標(biāo)記的分子共同定位運(yùn)用全內(nèi)反射熒光顯微鏡對(duì)分子間相互作用可以直接觀察，熒光共聚焦能量轉(zhuǎn)移也能夠檢測(cè)到。 ? （ 2）由于拉曼散射，瑞利散射和雜質(zhì)熒光等產(chǎn)生的背景光，極大的 干擾 了信號(hào)光的探測(cè)。 二者比較 棱鏡型全內(nèi)反射熒光顯微鏡 物鏡型全內(nèi)反射熒光顯微鏡 05級(jí)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn) 宋一萌 90513111 ? 全內(nèi)反射熒光顯微技術(shù)利用全內(nèi)反射產(chǎn)生的消逝波激發(fā)樣品，由于消逝波強(qiáng)度成指數(shù)衰減，使激發(fā)區(qū)域限定在樣品表面的一薄層范圍內(nèi)，因此具有其它光學(xué)成像技術(shù)無(wú)法比擬的高信噪比。 （一）棱鏡型全內(nèi)反射熒光顯微鏡 ? 利用激光經(jīng)過(guò)棱鏡并產(chǎn)生 全內(nèi)反射 ，其消逝波照射已被熒光標(biāo)記的生物樣品，其激發(fā)光從另一側(cè)進(jìn)入物鏡并被 CCD相機(jī)捕捉。 θc=sin1(n2/n1) 即所有的入射光線全部反射出來(lái) ,稱為全內(nèi)反射 熒光激發(fā)原理 沿著入射面上的介質(zhì)邊界傳播 在平行界面方向以平行波場(chǎng)方式傳播 在垂直界面方向則是呈指數(shù)衰減。 這是首次嘗試用全內(nèi)反射熒光法測(cè)液體中的單個(gè)分子的熒光。全內(nèi)反射熒光顯微鏡 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn) 05級(jí) 張園 鄭雪飛 宋一萌 解依荻 發(fā)展歷史 優(yōu)勢(shì)應(yīng)用 分型及結(jié)構(gòu) 基本原理 發(fā)展與展望 發(fā)展歷史 熒光顯微鏡的概念 全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)的發(fā)展歷程 細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對(duì)這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。將全反射理論與生物細(xì)胞的熒光成像技術(shù)相結(jié)合是一種全新的突破。 隱失波的強(qiáng)度 深度圖 熒光激發(fā)原理 非均勻波 透射強(qiáng)度和浸透深度公式 T12（ θi） 分界面處的透射強(qiáng)度 d 12 滲透深度 θi 入射角 λ 入射光波長(zhǎng) 對(duì)于可見(jiàn)光波長(zhǎng)380 ～ 780nm而言，浸透深度為～100nm。 棱鏡型全內(nèi)反射熒光顯微鏡光路示意圖 評(píng)價(jià) 棱鏡型系統(tǒng)在實(shí)現(xiàn)上更加容易，它只需要激光 光源、棱鏡和顯微鏡。 ? 當(dāng)今世界上研究單分子科學(xué)最具前途的新型生物光學(xué)顯微技術(shù)之一 ? 可用來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)
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