全內(nèi)反射熒光顯微鏡(完整版)
【正文】 大約為 500800nm，要大于全內(nèi)反射熒光顯微鏡的光學薄層的厚度（ 200nm）。 ? 全內(nèi)反射顯微術 : 典型的垂直照明深度100nm。熒光標記的離子通道蛋白包埋到平面脂雙層中，然后用物鏡型全內(nèi)反射熒光顯微鏡觀察。 ? 如用環(huán)境敏感熒光基團標記的肌球蛋白，然后用分光鏡檢測。 ? 現(xiàn)在全內(nèi)反射熒光顯微術已被廣泛用于 ? 實時觀察單個肌漿球蛋白分子的運動 ? 單個蛋白分子對之間的熒光共振能量轉(zhuǎn)移 ( FRET) ? ATP 酶的翻轉(zhuǎn) ? 聚合物內(nèi)單個分子的結構變化 ? 生物質(zhì)膜附近的神經(jīng)分泌腺的顆粒運動 ?全內(nèi)反射熒光顯微術的發(fā)展一方面會在加強傳統(tǒng)優(yōu)勢的基礎上，即 動態(tài) 觀察生物大分子的結構、相互作用、物質(zhì)的分泌，同時在不斷的改進物鏡和CCD相機的性能基礎上進一步同其他儀器的結合，更多的用在生物細胞活體方面的研究。表達式為： ? NA = nsin（ u/2） ? nsin（ u/2） nsinθc ? NA 為物鏡的數(shù)值孔徑 , n ,u分別為物鏡的折射率 (浸沒油 ) 和孔徑角。 目前使用 CCD 探測 ,可達到的量子產(chǎn)率已到～ 80 % ,成像速率～ 200 Hz. 當對活細胞成像時 ,為了達到單分子級的靈敏度或是為了減少曝光時間 ,需要采用圖像增強器。這種方法的成像裝置簡單，極易和其它成像技術、探測技術相結合，目前已成功的實現(xiàn) 100nm甚至更低的空間分辨率。 20世紀 80年代早期 20世紀 90年代 新型物鏡透鏡、聚光鏡和超靈敏探測器的出現(xiàn)，使 TRIFM技術得到充分發(fā)展。 發(fā)展歷史 全內(nèi)反射熒光顯微術的發(fā)展歷程 近年來人們開發(fā)出了一系列光學顯微鏡。 1996年 Moerner小組又用這項技術實現(xiàn)了限制在丙烯酰胺膠體的納米孔中的單分子的三維成像。 黃色小圓點 表示被隱失波激發(fā)的熒光分子， 白色小圓點 表示未被激發(fā)的熒光分子。 放置樣品的空間受到棱鏡的限制。 ? 全內(nèi)反射熒光顯微術正是憑借其獨特的優(yōu)勢 (它的熒光激發(fā)深度只在～ 100 nm 的薄層范圍內(nèi) ),從而成為研究 細胞表面科學 如生物化學動力學、單分子動力學的最有前途的光學成像技術。 這些問題都可以利用全內(nèi)反射熒光顯微成像系統(tǒng)來解決 全內(nèi)反射熒光顯微鏡可以直接對細胞表面的過程進行觀測，而不受到來自細胞內(nèi)深層區(qū)域信號的干擾。 ? 離子通道通過負責神經(jīng)，肌肉興奮性細胞的質(zhì)膜調(diào)節(jié)離子電流和電化學勢。 ? 因此將全內(nèi)反射熒光顯微術與其它的顯微成像技術相結合來研究將是未來發(fā)展的一個新的方向。 全內(nèi)反射的應用比較 ? 共聚焦激光掃描顯微鏡（ CLSM） 和 雙光子激光掃描顯微鏡（ TPLSM） 則是可以檢測細胞質(zhì)內(nèi)熒光的技術。 雙光子激發(fā) 能 探索活細胞內(nèi)各種分子的實時動態(tài)，能實現(xiàn)在樣品中的高度精確定位。這種物鏡的新特性還包括精選了低自發(fā)熒光玻璃（通過全反射鍍膜和連接材料，顯著減少了自發(fā)熒光），提高了數(shù)值孔徑，增強了信號亮度。 ? 左側(cè)光口 ? 在這一光口上，原始圖像平面距顯微鏡鏡架 102mm，具有很大的靈活性，用以安裝濾色鏡轉(zhuǎn)盤或者超低 5X照相機適配器。 。（可選件） ? 底光口 使用 IX2TVR （ T型接口），獲得原始圖像。 新型的物鏡透鏡、聚光器和其它材料的引入 ?
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