【正文】 距之比； q為在雙目顯微鏡中所增設(shè)的棱鏡所起的放大倍數(shù)，一般取值為 。被觀察物體位于物鏡的前方，被物鏡作第一級放大后成一倒立的實像，然后此實像再被目鏡作第二級放大， 得到最大放大效果的倒立的虛像，位于人眼的明視距離處。第一章 顯微鏡技術(shù)和顯微鏡 掌握常用顯微鏡的結(jié)構(gòu)及性能特點 熟悉顯微 技術(shù)的基 礎(chǔ)理論， 顯微鏡的 應(yīng)用 了解顯微鏡的維護，顯微技術(shù)的進展 教 學(xué) 基 本 要 求 內(nèi) 容 提 要 第一節(jié) 光學(xué)顯微鏡 第二節(jié) 光學(xué)顯微鏡的分類及其應(yīng)用 第三節(jié) 電子顯微鏡 第四節(jié) 顯微鏡的維護 、常見故障及排除 第五節(jié) 顯微攝影術(shù) 第一節(jié) 光 學(xué) 顯 微 鏡 一 、光學(xué)顯微鏡的工作原理 二 、光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) 三 、光學(xué)顯微鏡的性能參數(shù) 四 、像差和色差 五 、光學(xué)顯微鏡的不足之處 一、光學(xué)顯微鏡的工作原理 顯微鏡是由兩組會聚透鏡組成的光學(xué)折射成像系統(tǒng)。把焦距較短、靠近觀察物、成實像的透鏡組稱為物鏡（ object lens），而焦距較長，靠近眼睛、成虛像的透鏡組稱為目鏡（ ocular lens）。 光學(xué)顯微鏡的工作原理圖 ① 機械部分：鏡座、鏡柱、鏡臂、鏡筒、調(diào)焦裝置、載物臺（物鏡轉(zhuǎn)換器） ② 光學(xué)部分：目鏡、物鏡、反光鏡、聚光鏡 放大倍數(shù)： 目鏡的放大倍數(shù) 物鏡的放大倍數(shù) 二、光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) 三、光學(xué)顯微鏡的性能參數(shù) (一 ) 放大率 (二 )數(shù)值孔徑 (三 )分辨率 (四 )視野 (五 ) 景深與焦長 (六 )鏡像亮度和清晰度 (七 )工作距離 (一 ) 放 大 率 顯微鏡的放大率 (amplification)或稱放大倍數(shù)是指顯微鏡經(jīng)多次成像后最終所成 (放大的 )像的大小相對于原物體大小的比值，常記作 M。 (二 ) 數(shù) 值 孔 徑 數(shù)值孔徑 (numerical aperture)又叫鏡口率，是物體與物鏡間媒質(zhì)的折射率 n與物鏡孔徑角的一半 (β)正弦值的乘積，通?？s寫為 NA，即 NA=nsinβ 顯微鏡的數(shù)值孔徑與其放大率成正比，與分辨率、景深成反比，它的平方與圖像亮度成正比。 D= N?sinα/2 D：分 辨 率 λ ：光波的波長 N：介質(zhì)折射率 α ：物鏡鏡口角 N與 D成反比 ， λ與 D成正比 (三 ) 分 辨 率 提高顯微鏡分辨率的方法 （ 1）增大物鏡的數(shù)值孔徑 在物鏡和蓋玻片之間充以 n 較大的油，如香柏油 n =,不僅使 n 增大，而且孔徑角也增大。 (四 ) 視 野 視野 (visual field)又稱視場(field)，是指通過顯微鏡所能看到標(biāo)本所在空間的范圍。 景物不動，像平面沿光軸前后移動的距離稱“焦長”。高倍率工作條件下的暗場、偏光、攝影顯微鏡等都需要足夠的亮度，與照明及物鏡的性能參數(shù)相關(guān)。 (七 ) 工 作 距 離 工作距離是指從物鏡前表面中心到被觀察標(biāo)本間滿足工作要求的距離范圍，與物鏡的數(shù)值孔徑成反比。 四、像 差 和 色 差 (一 ) 像差 1．球差 ( spheric aberration ) 2．彗差 (broom aberration) 3．像散 (astigmatism) 4．場曲 5．畸變 (distortion) (二 ) 色差 (一 )、像 差 (aberration) 像差是指透鏡所成的像與理想像在形狀、顏色等方面存在差異。 球差可以通過設(shè)置光闌而減小。離光軸越近的像會聚越好，亮度越大，亮點越小。 透 鏡 的 彗 差 光軸 透鏡 3．像 散 (astigmatism) 遠離光軸的物點發(fā)出的光，即使是以細光束成像也不可能會聚于一點，而是在像空間不同的成像面上或者成橢圓彌散斑，或者在特殊位置形成圓形彌散斑，甚至是形成兩個垂直方向上的短亮線，這種成像缺陷稱為像散。 透 鏡 的 像 散 物點 物鏡 光軸 水平 焦平面 垂直 焦平面 明晰圓 4．場 曲 一個平面的物體通過透鏡成像后，雖然像平面上任意一點仍然是清晰的，但所成的像不再是一個平面，而成了一彎曲的面，這就是場曲。 畸變的原因是由于透鏡邊緣與透鏡近軸的放大率不同而引起的。 反之則形成邊緣放大率小而近軸放大率大的桶形畸變，稱為負(fù)畸變 。 透鏡的色差 透鏡的軸向色差（Ａ）和垂軸色差（Ｂ） Ａ B 五、光學(xué)顯微鏡的不足之處 ： ? 2022? ： ? ?m （可見光照明） ： ? ?m （要求金相準(zhǔn)備） 第二節(jié) 光學(xué)顯微鏡的分類及其應(yīng)用 一 、雙目生物顯微鏡 二 、熒光顯微鏡 三 、相襯顯微鏡 四 、倒置顯微鏡 五 、暗場顯微鏡 六 、紫外光顯微鏡 七 、偏光顯微鏡 八 、激光掃描共聚焦顯微鏡 九 、干涉相襯顯微鏡 十 、近場掃描光學(xué)顯微鏡 一、雙 目 生 物 顯 微 鏡 雙目顯微鏡 (binocular microscope)的結(jié)構(gòu)是利用一組復(fù)合棱鏡把透過物鏡后的光束分成強度相同的兩束而形成兩個中間像，分別再由左右目鏡放大。 目鏡 物鏡 聚光器 光源 一、雙 目 生 物 顯 微 鏡 二、熒 光 顯 微 鏡 熒光顯微鏡 (fluorescence microscopy)是以紫外線為光源來激發(fā)生物標(biāo)本中的熒光物質(zhì)，產(chǎn)生能觀察到各種顏色熒光的一種光學(xué)顯微鏡。 為防止紫外線進入物鏡，可以采用暗視場照明。 自發(fā)熒光：由細胞本身存在的物質(zhì)經(jīng)紫外線照射后發(fā)出的熒光。 二、熒 光 顯 微 鏡 熒 光 顯 微 鏡 的 種 類 A 透射式 B 落射式 熒 光 顯 微 鏡 的 主 要 部 件