【正文】 再被目鏡作第二級放大， 得到最大放大效果的倒立的虛像，位于人眼的明視距離處。第二章 顯微鏡技術(shù)和顯微鏡 掌握常用顯微鏡的結(jié)構(gòu)及性能特點 熟悉顯微 技術(shù)的基 礎(chǔ)理論， 顯微鏡的 應用 了解顯微鏡的維護，顯微技術(shù)的進展 教 學 基 本 要 求 ? ■ ? ? ? 內(nèi) 容 提 要 第一節(jié) 光學顯微鏡 第二節(jié) 光學顯微鏡的分類及其應用 第三節(jié) 電子顯微鏡 第四節(jié) 顯微鏡的維護 、常見故障及排除 第五節(jié) 顯微攝影術(shù) ? ■ ? ? ? 第一節(jié) 光 學 顯 微 鏡 一 、光學顯微鏡的工作原理 二 、光學顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) 三 、光學顯微鏡的性能參數(shù) 四 、像差和色差 五 、光學顯微鏡的不足之處 ? ■ ? ? ? 一、光學顯微鏡的工作原理 顯微鏡是由兩組會聚透鏡組成的光學折射成像系統(tǒng)。把焦距較短、靠近觀察物、成實像的透鏡組稱為物鏡（ object lens），而焦距較長，靠近眼睛、成虛像的透鏡組稱為目鏡（ ocular lens）。 ? ■ ? ? ? 光學顯微鏡的工作原理圖 ? ■ ? ? ? ① 機械部分：鏡座、鏡柱、鏡臂、鏡筒、調(diào)焦裝置、載物臺（物鏡轉(zhuǎn)換器） ② 光學部分：目鏡、物鏡、反光鏡、聚光鏡 放大倍數(shù)： 目鏡的放大倍數(shù) 物鏡的放大倍數(shù) 二、光學顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) ? ■ ? ? ? 三、光學顯微鏡的性能參數(shù) (一 ) 放大率 (二 )數(shù)值孔徑 (三 )分辨率 (四 )視野 (五 ) 景深與焦長 (六 )鏡像亮度和清晰度 (七 )工作距離 ? ■ ? ? ? (一 ) 放 大 率 顯微鏡的放大率 (amplification)或稱放大倍數(shù)是指顯微鏡經(jīng)多次成像后最終所成 (放大的 )像的大小相對于原物體大小的比值，常記作 M。 ? ■ ? ? ? (二 ) 數(shù) 值 孔 徑 數(shù)值孔徑 (numerical aperture)又叫鏡口率，是物體與物鏡間媒質(zhì)的折射率 n與物鏡孔徑角的一半 (β)正弦值的乘積，通?？s寫為 NA，即 NA=nsinβ 顯微鏡的數(shù)值孔徑與其放大率成正比，與分辨率、景深成反比，它的平方與圖像亮度成正比。 D= N?sinα/2 D：分 辨 率 λ ：光波的波長 N：介質(zhì)折射率 α ：物鏡鏡口角 N與 D成反比 ， λ與 D成正比 (三 ) 分 辨 率 ? ■ ? ? ? 提高顯微鏡分辨率的方法 （ 1）增大物鏡的數(shù)值孔徑 在物鏡和蓋玻片之間充以 n 較大的油，如香柏油 n =,不僅使 n 增大，而且孔徑角也增大。 ? ■ ? ? ? (四 ) 視 野 視野 (visual field)又稱視場(field)，是指通過顯微鏡所能看到標本所在空間的范圍。 景物不動，像平面沿光軸前后移動的距離稱“焦長”。高倍率工作條件下的暗場、偏光、攝影顯微鏡等都需要足夠的亮度，與照明及物鏡的性能參數(shù)相關(guān)。 ? ■ ? ? ? (七 ) 工 作 距 離 工作距離是指從物鏡前表面中心到被觀察標本間滿足工作要求的距離范圍，與物鏡的數(shù)值孔徑成反比。 ? ■ ? ? ? 四、像 差 和 色 差 (一 ) 像差 1．球差 ( spheric aberration ) 2．彗差 (broom aberration) 3．像散 (astigmatism) 4．場曲 5．畸變 (distortion) (二 ) 色差 ? ■ ? ? ? (一 )、像 差 (aberration) 像差是指透鏡所成的像與理想像在形狀、顏色等方面存在差異。 球差可以通過設置光闌而減小。離光軸越近的像會聚越好，亮度越大，亮點越小。 ? ■ ? ? ? 透 鏡 的 彗 差 光軸 透鏡 ? ■ ? ? ? 3．像 散 (astigmatism) 遠離光軸的物點發(fā)出的光，即使是以細光束成像也不可能會聚于一點，而是在像空間不同的成像面上或者成橢圓彌散斑，或者在特殊位置形成圓形彌散斑，甚至是形成兩個垂直方向上的短亮線，這種成像缺陷稱為像散。 ? ■ ? ? ? 透 鏡 的 像 散 物點 物鏡 光軸 水平 焦平面 垂直 焦平面 明晰圓 ? ■ ? ? ? 4．場 曲 一個平面的物體通過透鏡成像后，雖然像平面上任意一點仍然是清晰的，但所成的像不再是一個平面，而成了一彎曲的面，這就是場曲。 畸變的原因是由于透鏡邊緣與透鏡近軸的放大率不同而引起的。 反之則形成邊緣放大率小而近軸放大率大的桶形畸變，稱為負畸變 。 透鏡的色差 ? ■ ? ? ? 透鏡的軸向色差（Ａ）和垂軸色差（Ｂ） Ａ B ? ■ ? ? ? 五、光學顯微鏡的不足之處 ： ? 2022? ： ? ?m （可見光照明） ： ? ?m （要求金相準備） ? ■ ? ? ? 第二節(jié) 光學顯微鏡的分類及其應用 一 、雙目生物顯微鏡 二 、熒光顯微鏡 三 、相襯顯微鏡 四 、倒置顯微鏡 五 、暗場顯微鏡 六 、紫外光顯微鏡 七 、偏光顯微鏡 八 、激光掃描共聚焦顯微鏡 九 、干涉相襯顯微鏡 十 、近場掃描光學顯微鏡 ? ■ ? ? ? 一、雙 目 生 物 顯 微 鏡 雙目顯微鏡 (binocular microscope)的結(jié)構(gòu)是利用一組復合棱鏡把透過物鏡后的光束分成強度相同的兩束而形成兩個中間像，分別再由左右目鏡放大。 ? ■ ? ? ? 目鏡 物鏡 聚光器 光源 一、雙 目 生 物 顯 微 鏡 ? ■ ? ? ? 二、熒 光 顯 微 鏡 熒光顯微鏡 (fluorescence microscopy)是以紫外線為光源來激發(fā)生物標本中的熒光物質(zhì)，產(chǎn)生能觀察到各種顏色熒光的一種光學顯微鏡。 為防止紫外線進入物鏡，可以采用暗視場照明。 自發(fā)熒光：由細胞本身存在的物質(zhì)經(jīng)紫外線照射后發(fā)出的熒光。 二、熒 光 顯 微 鏡 ? ■ ? ? ? 熒 光 顯 微 鏡 的 種 類 A 透射式 B 落射式 ? ■ ? ? ? 熒 光 顯 微 鏡 的 主 要 部 件 透射式 ? 汞燈光源 ? 激發(fā)濾色鏡 ? 暗場聚光鏡 ? 吸收濾色鏡 落射式 ? 汞燈光源 ? 激發(fā)濾色鏡 ? 分