【文章內(nèi)容簡介】 cope）研究單個細胞的組成與變化情況。 ? ■ ? ? ? 七、偏 光 顯 微 鏡 偏光顯微鏡是利用光的偏振特性，對具有雙折射性 (即可以使一束入射光經(jīng)折射后分成兩束折射光 )的晶體、液晶態(tài)物質(zhì)進行觀察和研究的重要光學(xué)儀器。 利用它可以清楚地觀察到纖維絲、紡錘體、膠原、染色體、卵巢、骨骼、毛發(fā)、活細胞的結(jié)晶或液晶態(tài)的內(nèi)含物、神經(jīng)纖維、肌肉纖維、植物纖維等的細微結(jié)構(gòu)，從而可以分析細胞、組織的變化過程。 ? ■ ? ? ? 偏光顯微鏡是在一般顯微鏡的基礎(chǔ)上增添了使普通光轉(zhuǎn)變成線偏振光和檢測偏振光的裝置或觀察干涉圖樣的特殊透鏡。即光源前有偏振片（起偏器），使進入顯微鏡的光線為偏振光，鏡筒中有檢偏器（一個偏振方向與起偏器垂直的起偏器）。 七、偏 光 顯 微 鏡 ? ■ ? ? ? 偏光顯微鏡的載物臺是可以旋轉(zhuǎn)的。當(dāng)載物臺無樣品時，無論如何旋轉(zhuǎn)載物臺，由于兩個偏振片是垂直的，顯微鏡里看不到光線。而放入旋光性物質(zhì)后，由于光線通過這類物質(zhì)時發(fā)生偏轉(zhuǎn)，因此旋轉(zhuǎn)載物臺便能檢測到這種物體。 七、偏 光 顯 微 鏡 ? ■ ? ? ? 偏光顯微鏡的結(jié)構(gòu) ? ■ ? ? ? 激光掃描共聚焦顯微鏡原理圖 八、激光掃描共聚焦顯微鏡 ? ■ ? ? ? 激光掃描共聚焦顯微鏡實物圖 ? ■ ? ? ? 1. 激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理 激光掃描共聚焦顯微鏡是在熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ)上裝有激光掃描裝置，以單色激光作為光源，使樣品被激發(fā)出熒光，利用計算機進行圖像處理，從而得到細胞或組織內(nèi)部微細結(jié)構(gòu)的熒光圖像。 ? ■ ? ? ? 1. 激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理 共聚焦顯微鏡利用激光掃描束經(jīng)照明孔形成點光源對標本內(nèi)焦平面上的每一點掃描，由于照明孔與檢測孔相對于物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點同時聚焦于照明孔和檢測孔，焦平面以外的點不會在檢測孔處成像，這樣就得到了標本清晰的光學(xué)切面圖，克服了普通光鏡圖像模糊的缺點。 ? ■ ? ? ? 在顯微鏡載物臺上加一個微量步進馬達，使載物臺上下移動，改變焦平面，不同層次的光切面圖像經(jīng)計算機圖像三維重組，就能獲得樣品的立體結(jié)構(gòu)圖像。 1. 激光掃描共聚焦顯微鏡工作原理 ? ■ ? ? ? 2. 激光掃描共聚焦顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) ? ■ ? ? ? ，獲得清晰的圖像 2. 具有更高的軸向分辨率，并可獲取連續(xù)光學(xué)切片 3. 增加側(cè)向分辨率 4. 由于點對點掃描去除了雜散光的影響 3. 共焦顯微鏡與傳統(tǒng)顯微鏡的區(qū)別 ? ■ ? ? ? 4. CLSM在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用 1．細胞的三維重建 2．細胞定量熒光測定 3． 細胞內(nèi)鈣離子、 pH值和其它離子的動態(tài)分析 4． 細胞間通訊和膜的流動性 ? ■ ? ? ? 九、干涉相襯顯微鏡 （ interference contrast microscope） 干涉相襯顯微鏡利用偏振光，有四個特殊的光學(xué)組件：偏振器、棱鏡、滑行器和檢偏器。 偏振器直接裝在聚光系統(tǒng)的前面，使光線發(fā)生線性偏振。在聚光器中安裝了石英 Wollaston棱鏡，可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光（ x和 y），二者成一小夾角。聚光器將兩束光調(diào)整成與顯微鏡光軸平行的方向。最初兩束光相位一致，在穿過標本相鄰的區(qū)域后，由于標本的厚度和折射率不同，引起兩束光發(fā)生光程差。 ? ■ ? ? ? 在物鏡的后焦面處安裝了第二個 Wollaston棱鏡(滑行器 )，把兩束光波合并成一束。這時兩束光的偏振面（ x和 y）仍然存在。 最后光束穿過第二個偏振裝置 (檢偏器 )，檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光，使二者發(fā)生干涉。 九、干涉相襯顯微鏡 ? ■ ? ? ? x和 y波的光程差決定著透射光的多少，光程差值為 0時，沒有光穿過檢偏器；光程差值等于波長一半時，穿過的光達到最大值。于是在灰色的背景上，標本結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)明暗差。 九、干涉相襯顯微鏡 ? ■ ? ? ? 為了使影像的反差達到最佳狀態(tài)，可調(diào)節(jié)滑行器的縱行微調(diào)改變光程差，光程差可改變影像的亮度。調(diào)節(jié)滑行器可使標本的細微結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出正或負的投影形象，通常是一側(cè)亮，而另一側(cè)暗，這便造成了標本的人為三維立體感，類似大理石上的浮雕。 九、干涉相襯顯微鏡 ? ■ ? ? ? 干涉相襯顯微鏡的光路圖 ? ■ ? ? ? 十、近場掃描光學(xué)顯微鏡 （ nearfield scanning optical microscope） 近場掃描光學(xué)顯微鏡的微探頭是一個中空的、針狀的、頂部小于 150nm，內(nèi)孔直徑為 50nm的玻璃微管，管壁鍍鋁膜，最終使光線只能從直徑為50nm（可見波長的 1/10左右）的內(nèi)孔射入，微管的尾部接上十分靈敏的光量子探測器測量進入內(nèi)孔的光量。 ? ■ ? ? ? 近場掃描光學(xué)顯微鏡技術(shù)的理論分辨率極限約10nm。由于采用可見光對生物樣品損害很少，而且既可以用在空氣中（與電子顯微鏡必須在真空條件下相比要優(yōu)越），又可以用在水中（與一般的光學(xué)顯微鏡相比也有優(yōu)越性）。 近場掃描光學(xué)顯微鏡技術(shù)將對研究活體中的病毒和染色體等生物物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和形態(tài)發(fā)揮作用。 十、近場掃描光學(xué)顯微鏡 ? ■ ? ? ? 第 三 節(jié) 電 子 顯 微 鏡 一 、電子顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) 二 、電子顯微鏡的分類及其應(yīng)用 光鏡分辯極限為 ?m，小于 ?m的微細結(jié)構(gòu)的光波可產(chǎn)生衍射現(xiàn)象 ,這種光波經(jīng)過物體時可繞過物體就象無物體經(jīng)過一樣 ,因此無法用光鏡觀察。這就需要一種更大分辮力的儀器來觀察比?m更小的物體的微細結(jié)構(gòu)。 ? ■ ? ? ? 一、電子顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) ? 電子光學(xué)系統(tǒng) ? 真空系統(tǒng) ? 供電系統(tǒng) ? 機械系統(tǒng) ? 觀察顯示系統(tǒng) 照明系統(tǒng) 成像系統(tǒng) ? ■ ? ? ? （一）電子光學(xué)系統(tǒng) —— 照明系統(tǒng) ? 照明系統(tǒng)主要由 電子槍 和 聚光鏡 組成。 ? 電子槍是發(fā)射電子的照明光源。 ? 聚光鏡是把電子槍發(fā)射出來的電子會聚而成的交叉點進一步會聚后照射到樣品上。 ? 照明系統(tǒng)的作用就是提供一束亮度高、照明孔徑角小、平行度好、束流穩(wěn)定的照明源。 ? ■ ? ? ? 1. 電 子 槍 電子槍是電鏡的電子發(fā)射源，其作用是形成電子束，并控制電子束的發(fā)射，獲得一高亮度和高穩(wěn)定度的照明電子光源。 常用的電子槍由常用的是熱陰極三極電子槍，它由發(fā)夾形鎢絲陰極、柵極帽和陽極組成。 ? ■ ? ? ? 電子槍的結(jié)構(gòu)及工作原理圖 ? ■ ? ? ? 燈 絲 ? ■ ? ? ? 2. 聚 光 鏡 聚光鏡用來會聚電子槍射出的電子束，以最小的損失照明樣品，調(diào)節(jié)照明強度、孔徑角和束斑大小。一般都采用雙聚光鏡系統(tǒng)。第一聚光鏡是強激磁透鏡，束斑縮小率為 10～ 50倍左右，將電子槍第一交叉