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臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)-文庫(kù)吧資料

2024-10-13 14:03本頁(yè)面
  

【正文】 后,結(jié)合于固相載體上復(fù)合物中被測(cè)定的酶標(biāo)抗原的量(酶活性)與樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中非標(biāo)記抗原的濃度成反比。用于測(cè)定小分子抗原,如藥物、激素等。若待測(cè)抗原濃度過高時(shí),過量的抗原可分別同固相抗體和酶標(biāo)抗體結(jié)合而抑制夾心復(fù)合物的形成,出現(xiàn)鉤狀效應(yīng),顯色降低,甚至假陰性。:針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同且空間距離較遠(yuǎn)的決定簇,包被使用一種單抗,酶標(biāo)記使用另一種單抗。如血清標(biāo)本中有類風(fēng)濕因子(RF)存在,則可出現(xiàn)假陽性反應(yīng),因?yàn)镽F是一種抗變性IgG的自身抗體,它能與多種動(dòng)物的變性IgG的Fc部分結(jié)合,因此RF就可作為固相抗體和酶標(biāo)抗體之間的橋接抗原。二、方法類型及反應(yīng)原理(一)檢測(cè)抗原的方法:屬于非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,檢測(cè)抗原最常用的方法,檢測(cè)含有至少兩個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原。第三節(jié) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一、基本原理把抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面,測(cè)定時(shí)將受檢樣品和酶標(biāo)記抗原或抗體與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物;洗去未結(jié)合成分;加入底物后,底物被固相載體上的酶催化變成有色產(chǎn)物。:先將樣品(或標(biāo)準(zhǔn)品)與抗體混合反應(yīng)達(dá)平衡,然后加入酶標(biāo)記抗原繼續(xù)溫育一段時(shí)間,測(cè)定離心沉淀物(酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物)中加入酶底物液后的呈色吸光度值。酶標(biāo)志物具有更好的穩(wěn)定性,且無放射性污染。二、異相酶免疫測(cè)定是目前應(yīng)用最廣泛的一類標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。標(biāo)本中的抗原和酶供體(ED)標(biāo)記的抗原與特異性抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,形成兩種抗原抗體復(fù)合物。(二)克隆酶供體免疫分析(CDEIA)DNA重組技術(shù)可分別合成某種功能酶(如βD半乳糖苷酶)分子的兩個(gè)片段,大片段稱為酶受體(EA),小分子稱作酶供體(ED),兩者單獨(dú)均無酶活性,一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性。當(dāng)與抗體結(jié)合后,所標(biāo)的酶與抗體密切接觸,使酶的活性中心受到影響而活性被抑制。該法主要用于小分子激素和半抗原(如藥物)的測(cè)定,均相法的優(yōu)點(diǎn)是適合于自動(dòng)化測(cè)定,但反應(yīng)中被抑制的酶活力較小,需用靈敏的光度計(jì)測(cè)定,反應(yīng)的溫度也需嚴(yán)格控制。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需將結(jié)合和游離的酶標(biāo)志物分離,EIA一般可分為均相和異相兩種類型。第二節(jié) 酶免疫技術(shù)的分類包括兩種:酶免疫組織化學(xué)技術(shù):用于組織切片或其他標(biāo)本中抗原的定位。包被好的固相載體在低溫可放置一段時(shí)間而不失去免疫活性。(三)包被與封閉:將抗原或抗體結(jié)合在固相載體上的過程。自動(dòng)化檢測(cè)中常用。均勻地分散到整個(gè)反應(yīng)溶液中,因此反應(yīng)速度快。主要缺點(diǎn)是抗體(抗原)結(jié)合容量不高、固相抗體(抗原)脫吸附率較高且不均一,孔間變異大,重復(fù)性差,從而影響測(cè)定的靈敏度、精確度及檢測(cè)范圍。(二)固相載體的種類和選擇:聚苯乙烯塑料最常采用。固相抗體或抗原就是把抗體或抗原結(jié)合到固相載體的表面上,是酶免疫技術(shù)中將游離和結(jié)合的酶標(biāo)志物迅速分離的最常用方法。,滴加酶的底物溶液,若沉淀線上顯色,則酶標(biāo)記物中的酶活性仍保留。常用免疫電泳或雙相擴(kuò)散法進(jìn)行鑒定。HRP標(biāo)記抗體或抗原的最常用方法。先將HRP與戊二醛作用,透析除去戊二醛。②缺點(diǎn):交聯(lián)時(shí)分子間比例不嚴(yán)格,大小不一,影響效果。(1)一步法:連接AP
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