臨床醫(yī)學(xué)檢驗考試輔導(dǎo)醫(yī)學(xué)檢驗-在線瀏覽
2024-10-13 14:03本頁面
【正文】 ：同源雙功能交聯(lián)劑。①優(yōu)點：操作簡便、有效，重復(fù)性好。（2）二步法：連接HRP。優(yōu)點：酶標(biāo)志物質(zhì)量較均一，標(biāo)記效率也較一步法高。（二）酶標(biāo)記物的純化及鑒定常用的純化方法有葡聚糖凝膠G200/G150過柱層析純化和50%飽和硫酸銨沉淀提純等。（抗原）具有免疫活性。三、固相載體除均相酶免疫測定外，各種非均相酶免疫測定反應(yīng)最后都需要分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物。（一）固相載體的要求 結(jié)合抗體或抗原的容量大；可將抗體或抗原牢固地固定在其表面，經(jīng)長期保存和多次洗滌也不易脫落；不影響所固定的抗體或抗原的免疫反應(yīng)性，而且為使反應(yīng)充分進(jìn)行，最好其活性基團(tuán)朝向反應(yīng)溶液，固相方法簡便易行，快速經(jīng)濟(jì)?？乖蚩贵w以非共價或物理吸附方式結(jié)合到此載體上。目前采用非共價和化學(xué)偶聯(lián)共價吸附方法進(jìn)行抗原或抗體的固相化可改善上述缺點：易與抗體（抗原）形成化學(xué)偶聯(lián)，且結(jié)合容量大?？芍瞥纱呕㈩w粒。：常有硝酸纖維素膜（Nc）、玻璃纖維素膜及尼龍膜等通過非共價鍵吸附抗體（抗原），廣泛用于定性或半定量斑點ELISA的固相載體。普遍使用的聚苯乙烯載體，將抗原或抗體溶于緩沖液（）中，加于ELISA板孔中4℃過夜。：包被的蛋白質(zhì)濃度過低，固相載體表面不能被此蛋白質(zhì)完全覆蓋，其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會部分地吸附于固相載體表面，最后產(chǎn)生非特異性顯色致本底偏高，在這種情況下，需用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清再包被一次，消除此干擾，此過程稱為封閉。酶免疫測定技術(shù)（EIA）：用于液體標(biāo)本中抗原或抗體的定性和定量。一、均相酶免疫測定利用酶標(biāo)志物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，標(biāo)記酶的活性會發(fā)生改變的原理，可以在不將結(jié)合和游離酶標(biāo)志物分離的情況下，通過測定標(biāo)記酶的活性的改變，而確定抗原或抗體的含量。（一）酶放大免疫測定技術(shù)（EMIT）EMIT的基本原理是半抗原與酶結(jié)合成酶標(biāo)半抗原。反應(yīng)后酶活力大小與標(biāo)本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測定結(jié)果就可推算出標(biāo)本中半抗原的量?？寺∶腹w免疫測定（CDEIA）的反應(yīng)模式為競爭法。ED標(biāo)記的抗原與抗體結(jié)合后由于空間位阻，不再能與酶受體（EA）結(jié)合，而游離的ED標(biāo)記的抗原上的ED可和EA結(jié)合，形成具有活性的酶，加入底物測定酶活性，酶活力的大小與標(biāo)本中抗原含量成正比。（一）異相液相酶免疫測定 主要用于檢測樣品中極微量的短肽激素和某些藥物等小分子半抗原。：將待測樣品抗原、酶標(biāo)抗原及特異性抗體進(jìn)行一次性溫育，待反應(yīng)達(dá)平衡后，測定離心沉淀物（酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物）中加入酶底物液后的呈色吸光度值。（二）固相酶免疫測定 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。故：①固相的抗原或抗體；②酶標(biāo)記的抗原或抗體；③酶反應(yīng)的底物三種試劑為反應(yīng)必備。原理是先將特異性抗體與固相載體連接；加入待測標(biāo)本，形成固相抗原抗體復(fù)合物；再加入酶標(biāo)抗體形成雙抗體夾心，洗滌；加底物顯色，根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量檢測。雙抗體夾心法只適用于二價或以上的較大分子抗原的測定，不能用于小分子半抗原的檢測。測定時將待測抗原和酶標(biāo)抗體同時加入，溫育、洗滌，加入底物顯色。
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