maldi-tof-ms病原體鑒定質量保證專家共識-文庫吧資料
2024-10-06 01:26本頁面
【正文】 計劃。如果未發(fā)現(xiàn)上述明顯的原因可重復測定質控菌株/蛋白標準品，結果在控，可直接進行后續(xù)檢測；若不能糾正，應聯(lián)系制造商采取相應的措施。常見原因包括：質控菌株/蛋白標準品污染、使用錯誤的質控菌株/蛋白標準品、使用錯誤的試劑、操作人員的操作失誤等。陰性對照需使用空白試劑，用于排除可能由試劑污染或重復性靶板(陰性對照應為任意孔位)清洗不當造成的假陽性結果。4．陽性對照：使用大腸埃希菌標準菌株(ATCC8739)鑒定分值必須達到制造商要求；如使用標準蛋白測試品，在分子量大于12 000以上的區(qū)域必須出現(xiàn)校準峰，應明確檢測到m/z 13 683和16 952兩個峰，確保高分子量端的準確性。2．質控操作及頻率：按照制造商的SOP文件要求，在靶板清洗、基質溶液及標準品溶液配制后需每次進行陰性及陽性對照的質量控制，每次病原體鑒定時亦應如此。1．質控菌株：質控陽性對照菌株種類應根據實驗室擬開展的鑒定病原體范圍進行選擇，質控菌株可采用制造商建議的標準菌株或經實驗室測序等方法確認的臨床菌株。實驗室需按照MALDI－TOF MS制造商的推薦及相關管理指南制定質控程序。3．化學試劑：必須使用儀器制造商要求純度的化學試劑。MALDI－TOF MS鑒定結果為以下病原體時，需通過相應的補充實驗進行進一步鑒別。2．結果閾值：目前MALDI－TOF MS的結果閾值通常分為兩種：一種以置信度為閾值，置信度90%的單一結果為優(yōu)質鑒定結果，60%～90%且具有多個鑒定結果為低分辨結果(需要補充實驗進行分類)，60%為不能鑒定；另一種則以分值為閾值，質譜評分2分()的結果可以鑒定到種，(～)之間可以鑒定到屬(需要補充實驗進行分類)，()為不能鑒定或可能鑒定到屬。(二)分析中一般情況下，MALDI－TOF MS檢測可以得到以下幾種鑒定結果：(1)高置信的鑒定結果；(2)多個鑒定結果，且每個結果的置信度相似；(3)無鑒定結果。5．樣本準備注意事項：(1)靶板點樣加入基質液后，需完全干燥形成結晶方可進行檢測。4．特殊病原體：如分枝桿菌、絲狀真菌和諾卡菌等需要通過蛋白提取法進行提取前處理，包括使用甲酸、乙腈、破壁硅珠管等試劑耗材。點樣時應注意菌量適當、厚度均勻，不可帶有瓊脂成分。(一)分析前1．菌株準備：所有菌株均采用新鮮培養(yǎng)(16～48 h)的單個菌落，推薦細菌采用血瓊脂平板培養(yǎng)，真菌采用沙保羅平板培養(yǎng)，凍存菌株傳代兩次后使用。
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