【正文】 分化成為PGC，檢測RA、BMP等5種以上信號分子對PGC分化的影響。3， 初步建立胚胎干細(xì)胞（或誘導(dǎo)多能干細(xì)胞）體外培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)體系。預(yù)期目標(biāo)：1， 建立和完善高通量研究蛋白互動網(wǎng)絡(luò)的技術(shù)平臺，包括蛋白質(zhì)組學(xué)平臺，BiFC組學(xué)平臺, 基因組學(xué)平臺，生物信息學(xué)平臺。7，在人胚胎干細(xì)胞中創(chuàng)建穩(wěn)定表達(dá)標(biāo)志PGC特化的報告基因體系。5，開展小鼠曲細(xì)精管注射及卵母細(xì)胞胞漿注射實(shí)驗(yàn)，建立精原干細(xì)胞和精子細(xì)胞的功能檢測體系，以便于對體外誘導(dǎo)分化所得精原（精子）細(xì)胞的生物學(xué)功能加以驗(yàn)證。3，利用蛋白質(zhì)組學(xué)及BiFC組學(xué)研究技術(shù), 系統(tǒng)地從human ORFeome (12000 個基因) 或其他逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)庫中篩選直接與Nanog, Oct4，RAR/RXR, Smad相互作用的蛋白。課題承擔(dān)單位： 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)課題負(fù)責(zé)人： 朱 捷 教授 （中國農(nóng)業(yè)大學(xué)）主要學(xué)術(shù)骨干： 陳瑤生 教授 （中山大學(xué)）周光斌 副教授 （中國農(nóng)業(yè)大學(xué)） 于政權(quán) 副教授 （中國農(nóng)業(yè)大學(xué)）課題經(jīng)費(fèi)比例 占申請經(jīng)費(fèi)的23%四、年度計劃第一年：1, 建立較為理想的從小鼠胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)PGC形成的培養(yǎng)體系。5， 通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)、選擇合適的生長因子、轉(zhuǎn)錄因子和培養(yǎng)體系誘導(dǎo)牛ES細(xì)胞分化為雄性生殖細(xì)胞，為經(jīng)濟(jì)動物的改良服務(wù)。研究內(nèi)容：1，參照人和動物ES細(xì)胞建系的技術(shù)，選用不同胚齡及各種附植前牛胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，建立合適的牛ES細(xì)胞體外培養(yǎng)體系。課題承擔(dān)單位： 華東師范大學(xué)課題負(fù)責(zé)人： 王 媛 特聘教授 （華東師范大學(xué)）主要學(xué)術(shù)骨干： 李大力 副研究員 （華東師范大學(xué)）周文良 教授 （中山大學(xué)）葉希韻 副教授 （華東師范大學(xué)）課題經(jīng)費(fèi)比例： 占申請經(jīng)費(fèi)的23%。2， 利用轉(zhuǎn)基因及基因敲除技術(shù)，建立特定基因過量表達(dá)或缺失的胚胎干細(xì)胞株及小鼠模型，探討關(guān)鍵基因（如激素受體及BMP家族）在小鼠PGC特化過程中的功能及體內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控模式。課題3， 誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向原始生殖細(xì)胞分化的體系及機(jī)理研究研究目標(biāo)：本課題將完善胚胎干細(xì)胞分化為PGC的技術(shù)體系，建立PGC特化過程中關(guān)鍵因子的轉(zhuǎn)基因及基因敲除的胚胎干細(xì)胞株及小鼠模型，揭示關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子及信號網(wǎng)絡(luò)在PGC形成過程中的功能及調(diào)控機(jī)理。3．利用全細(xì)胞成像及分子生物學(xué)技術(shù)分析誘導(dǎo)分化的雄性生殖細(xì)胞，通過小鼠曲細(xì)精管內(nèi)細(xì)胞注射和卵細(xì)胞胞漿內(nèi)精子注射，探索體外誘導(dǎo)分化的生殖細(xì)胞的生物學(xué)功能及其對小鼠胚胎發(fā)育的影響。2，通過生物信息學(xué)技術(shù)，利用RAR/RXR在DNA結(jié)合區(qū)域的序列保守性，檢索精子前體細(xì)胞中RA信號調(diào)控的靶基因。課題承擔(dān)單位： 中山大學(xué) 課題負(fù)責(zé)人： 松陽洲 教授 （中山大學(xué)）主要學(xué)術(shù)骨干： 張 雁 教授 （中山大學(xué)）項(xiàng) 鵬 教授 （中山大學(xué)） 周天壽 教授 （中山大學(xué)） 張勤奮 副教授 （中山大學(xué)）王繼剛 講師 （華東師范大學(xué)）李鯤鵬 講師 （中山大學(xué)）課題經(jīng)費(fèi)比例： 占申請經(jīng)費(fèi)的31% 課題2，雄性生殖細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化的基因表達(dá)及調(diào)控機(jī)理研究研究目標(biāo)：通過對精原干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞的表觀遺傳，基因表達(dá)和表面蛋白差異的系統(tǒng)分析，對視黃素(RA)信號通路及其在精子生成細(xì)胞中誘導(dǎo)減數(shù)分裂功能的特異性分析，闡述精原干細(xì)胞分化的調(diào)控機(jī)制，為干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化雄性生殖細(xì)胞提供依據(jù)。3, 利用四環(huán)素調(diào)節(jié)表達(dá)系統(tǒng), RNAi, ChIP等技術(shù)闡述端粒蛋白以及端粒酶在干細(xì)胞向PGC誘導(dǎo)過程中的作用與機(jī)理。2, 以Blimp1 、Stella, PITX2, ckit、Stra8, vasa和DAZL等重要的PGC表達(dá)基因?yàn)槟Ｊ剑?從PGC或生殖母細(xì)胞調(diào)控元及與其相互作用的蛋白質(zhì)組中篩選出控制這些基因表達(dá)的關(guān)鍵因子。在此基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)若干新的調(diào)控干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子和染色質(zhì)修飾因子，在整體細(xì)胞水平上初步確立干細(xì)胞向生殖細(xì)胞分化的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。本項(xiàng)目期望在誘導(dǎo)干細(xì)胞生成生殖細(xì)胞關(guān)鍵科學(xué)問題上取得重大突破性成果，保證按期完成項(xiàng)目的總體目標(biāo)和五年目標(biāo)。同時，首席科學(xué)家將在相關(guān)部門的領(lǐng)導(dǎo)下，根據(jù)國家規(guī)定，通過項(xiàng)目專家委員會，采用激勵和滾動機(jī)制對項(xiàng)目進(jìn)行管理。本項(xiàng)目的執(zhí)行采用首席科學(xué)家負(fù)責(zé)制。不但充分發(fā)揮子課題各承擔(dān)單位的技術(shù)和學(xué)科優(yōu)勢，而且加強(qiáng)優(yōu)勢力量的整合和協(xié)同攻關(guān)，發(fā)揚(yáng)團(tuán)隊(duì)精神，形成科研功能配套、統(tǒng)籌合理、機(jī)動靈活且充滿活力的科研體系。(2) 在研究方面，不只停留在單項(xiàng)技術(shù)或研究手段上，而是發(fā)展綜合技術(shù)平臺及多種細(xì)胞和動物模型。首席科學(xué)家聘任若干學(xué)術(shù)專家組成項(xiàng)目顧問專家組，參與項(xiàng)目的領(lǐng)導(dǎo)、組織、運(yùn)行和管理，協(xié)助項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，調(diào)整和確定項(xiàng)目的方向及技術(shù)路線，制定有效可行的研究計劃，指導(dǎo)協(xié)調(diào)各課題的工作，督促各課題間的交流，并審核各子課題的進(jìn)展情況。項(xiàng)目規(guī)劃管理和運(yùn)作體制包括總項(xiàng)目和子課題兩個層次。5，組織方式(1)在組織方面，以總體研究方案為中心，強(qiáng)調(diào)團(tuán)隊(duì)化、體系化。這些可為人類提供高品質(zhì)食源，具有非常明顯的創(chuàng)新性。(3)本項(xiàng)目著眼于技術(shù)創(chuàng)新, 通過建立誘導(dǎo)干細(xì)胞生成生殖細(xì)胞的技術(shù)體系，獲得功能性生殖細(xì)胞，為大型經(jīng)濟(jì)動物優(yōu)良種群的培育提供技術(shù)支持。將基礎(chǔ)科學(xué)與實(shí)際應(yīng)用相結(jié)合，力爭在解答基礎(chǔ)科學(xué)問題的同時，發(fā)展新的動物繁殖技能。本題目的創(chuàng)新性主要體現(xiàn)在：(1)本項(xiàng)目探討的問題是國際前沿的科學(xué)問題，因此保證了項(xiàng)目的創(chuàng)新性。項(xiàng)目中的四個子課題既相互獨(dú)立，又交叉互補(bǔ)。本項(xiàng)目課題組成員熟悉當(dāng)前的研究狀況和方法，對本項(xiàng)目的研究具有較強(qiáng)的掌控能力和應(yīng)變能力，能夠保證項(xiàng)目的順利完成。其三，承擔(dān)本項(xiàng)目研究工作的中堅力量和學(xué)術(shù)骨干多數(shù)是新近從海外留學(xué)工作歸國的成績卓著的中青年科學(xué)家，擁有豐富的研究成果和研究經(jīng)驗(yàn)，多次在國際著名專業(yè)雜志上發(fā)表論文。中山大學(xué)及其他參與的單位擁有大型及關(guān)鍵性儀器設(shè)備，采用公共平臺建設(shè)方式，已擁有的條件（動物房和儀器設(shè)備等）、各重點(diǎn)學(xué)科實(shí)驗(yàn)室等設(shè)備均可公用，這將為本項(xiàng)目提供較全面的技術(shù)條件。其次，項(xiàng)目承擔(dān)單位具有良好