【正文】 outh et al, 20xx )、枯草芽孢桿菌 (Ongena, 20xx)等均能誘導(dǎo)多種果蔬發(fā)生生理生化反應(yīng)，提高果蔬自身的抗性，減少其在采后貯藏期的腐爛。 (4)誘導(dǎo)抗性 近年來(lái)，拮抗菌株誘導(dǎo)采后果蔬產(chǎn)生抗性成為了果蔬采后貯藏期病害生物防治的研究熱點(diǎn) (李淼 , 20xx)。王亮等的研究表明梅奇酵母 XY201在冬棗表皮具有很強(qiáng)的定殖能力，在人工氣調(diào)條件下貯藏，梅奇酵母 XY201 能有效抑制冬棗黑斑病的發(fā)生，使發(fā)病率降低 %%(王亮等 , 20xx)。寄生作用是拮抗真菌菌株發(fā)揮生防作用的重要機(jī)制之一，如哈茨木霉(Benhamou and chet, 1993)的菌絲定向生長(zhǎng)擴(kuò)展伸向有害真菌，當(dāng)接觸到病原真菌后，它的菌絲吸附于于病原真菌菌絲體周圍，通過(guò)分泌 蛋白酶、幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶等可以降解有害真菌細(xì)胞壁的酶類來(lái)破壞其細(xì)胞骨架，致使其消解死亡，從而表現(xiàn)出抗真菌活性。范青等的研究表明枯草芽孢桿菌 B912 對(duì)柑橘采后青霉病和綠霉病具有較好的抑制效果，菌株 B912 的抑菌機(jī)理主要是產(chǎn)生抗菌素 (范青等 , 20xx)。生防菌株分泌的胞外活性物質(zhì)通常在極低的濃度下就能對(duì)有害微生物的生長(zhǎng)代謝活動(dòng)產(chǎn)生抑制作用，如熒光假單胞菌產(chǎn)生的吩嗪類抗生素 (朱棟華 , 20xx)、枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的脂肽類抗生素 (陳華等 , 20xx)、明串珠菌產(chǎn)生的細(xì)菌素 (李曼等 , 20xx)、木霉產(chǎn)生的木霉素 (申屠旭萍等 , 20xx)等。現(xiàn)有的研究結(jié)果表明，生防微生物菌株對(duì)有害微生物的作用方式主要有拮抗作用、寄生作用、競(jìng)爭(zhēng)作用和誘導(dǎo)抗性等。生防微生物的作用機(jī)制非常復(fù)雜，某一生防菌株的作用機(jī)制是單一的還是幾種機(jī)制協(xié)同作用也比較難以斷定，而且有些作用機(jī)制可能還尚未被發(fā)現(xiàn)。 河南工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 2 生防微生物概況 用于生物防治的微生物種類 利用微生物進(jìn)行各類食品的防腐保鮮就是選取不會(huì)對(duì)食品造成危害的微生物來(lái)抑制病原微生物的生長(zhǎng)繁殖，從而達(dá)到防止食品腐敗變質(zhì)或降低食品腐敗變 質(zhì)程度的目的，目前研究較多的生防微生物主要有芽孢桿菌 (Sharma et al, 20xx)、乳酸菌 (Jiang et al, 20xx)、放線菌 (Subramaniam et al, 20xx)、酵母菌 (Droby et al, 20xx)及霉菌 (Ippolito A et al, 20xx)等，如表 11 所示。利用微生物菌株及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行生物防治的研究開(kāi)發(fā)已引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注， 它主要是利用微生物及其代謝產(chǎn)物來(lái)抑制病原微生物的生長(zhǎng)繁殖從而達(dá)到防腐保鮮的目的， 生物防治方法是現(xiàn)階段各類食品防腐保鮮研究的熱點(diǎn) (賈士儒 , 20xx)。 由于物理和化學(xué)方法在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中存在一定局限性，迫切需要尋求更安全有效的防腐保鮮新技術(shù)。但低溫貯藏、輻照處理等物理方法均需要特定的專業(yè)設(shè)備，難以大面積的普及推廣應(yīng)用 (呂勞富和何勇 , 20xx)。 目前，用于各類食品防腐保鮮的方法主要有物理和化學(xué)的方法。據(jù) WHO 統(tǒng)計(jì)，全世界每年數(shù)以億計(jì)的食源性 疾病患者中， 70%是由病原微生物污染的食物引起的。 optimization of fermentation conditions I 目 錄 第一章 前言 ........................................................................................................... 1 研究背景 ................................................................................................... 1 生防微生物概況 ....................................................................................... 2 用于生物防治的微生物種類 ......................................................... 2 生防微生物的作用機(jī)制 ................................................................. 2 生防芽孢桿菌 ........................................................................................... 4 芽孢桿菌抑菌物質(zhì)研究概況 ................................................................... 4 本研究的目的和意義 ............................................................................... 6 第二章 廣譜拮抗菌株的篩選及其鑒定 ............................................................... 8 材料 ........................................................................................................... 8 樣品 ................................................................................................. 8 試劑 ................................................................................................. 9 儀器 ............................................................................................... 10 培養(yǎng)基 ........................................................................................... 10 供試有害微生物 ........................................................................... 11 方法 ......................................................................................................... 11 微生物培養(yǎng) ................................................................................... 11 細(xì)菌菌株分離純化 ....................................................................... 11 菌懸液制備 ................................................................................... 11 拮抗菌株初篩 ............................................................................... 12 拮抗菌株無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)濾液制備 ................................................... 12 拮抗菌株的復(fù)篩 ........................................................................... 12 拮抗菌株形態(tài)特征觀察 ............................................................... 13 拮抗菌株生理生化特性分析 ....................................................... 13 拮抗菌株 16S rDNA 序列分析 ................................................... 13 結(jié)果與分析 ............................................................................................. 14 細(xì)菌菌株的分離純化 ................................................................... 14 拮抗菌株初篩 ............................................................................... 15 拮抗菌株復(fù)篩 ............................................................................... 15 拮抗菌株 LM2303 鑒定結(jié)果 ....................................................... 17 結(jié)論與討 論 ............................................................................................. 19 第三章 菌株 LM2303 誘變選育 ......................................................................... 21 材料 ......................................................................................................... 21 微生物菌株 ................................................................................... 21 試劑 ............................................................................................... 21 培養(yǎng)基 ........................................................................................... 21 儀器設(shè)備 ....................................................................................... 22 方法 ......................................................................................................... 22 菌懸液制備 ................................................................................... 22 紫外線誘變 ................................................................................... 22 硫酸二乙酯 (DES)誘變 ................................................................ 22 微波誘變 ....................................................................................... 23 II 正突變株篩選 ............................................................................... 23 突變株遺傳穩(wěn)定性 ....................................................................... 24 結(jié)果與分析 ............................................................................................. 24 紫外線 (UV)誘變 .......................................................................... 24 硫酸二乙酯 (DES)誘變 .......................................................